[發(fā)明專利]一種外敷組合物及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010566150.4
• 申請日: 2020-06-19
• 公開（公告）號: CN111658669B
• 公開（公告）日: 2022-02-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐勤;徐大偉;袁雪靜;莊雪薇
• 申請（專利權(quán)）人: 北京本真工坊生物科技有限公司
• 主分類號: A61K35/17
• 分類號: A61K35/17;A61K36/899;A61P17/00;A61P37/08;A61P17/10;A61P17/04;C12N5/078;A61K31/728;A61K31/4172;A61K31/194;A61K31/047;A61K31/7048
• 代理公司: 北京匯信合知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11335
• 代理人: 林聰源

1.一種外敷組合物，其特征在于，按重量份計，由以下成分組成：1-10份免疫細(xì)胞外泌體提取物、0.1-5份蘆葦提取物、0.5-5份透明質(zhì)酸鈉、0.1-2份組氨酸、0.5-2份檸檬酸鹽、1-5份甘油、1-10份納米脂質(zhì)體和0.05-0.2份海參皂甙。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的外敷組合物，其特征在于，由以下成分組成：5份免疫細(xì)胞外泌體提取物、2份蘆葦提取物、5份透明質(zhì)酸鈉、1份組氨酸、0.9份檸檬酸鹽、1.5份甘油、5份納米脂質(zhì)體和0.2份海參皂甙。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的外敷組合物，其特征在于，由以下成分組成：8份免疫細(xì)胞外泌體提取物、1份蘆葦提取物、4份透明質(zhì)酸鈉、2份組氨酸、0.9份檸檬酸鹽、2份甘油、5份納米脂質(zhì)體和0.1份海參皂甙。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的外敷組合物，其特征在于，由以下成分組成：10份免疫細(xì)胞外泌體提取物、1.5份蘆葦提取物、3份透明質(zhì)酸鈉、1份組氨酸、0.9份檸檬酸鹽、1.5份甘油、3份納米脂質(zhì)體和0.05份海參皂甙。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的外敷組合物，其特征在于，由以下成分組成：10份免疫細(xì)胞外泌體提取物、1份蘆葦提取物、5份透明質(zhì)酸鈉、2份組氨酸、0.9份檸檬酸鹽、2份甘油、5份納米脂質(zhì)體和0.2份海參皂甙。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述的外敷組合物，其特征在于，所述免疫細(xì)胞外泌體提取物的制備方法包括：

獲取淋巴細(xì)胞；

培養(yǎng)所獲取的淋巴細(xì)胞并誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為免疫細(xì)胞；

獲取免疫細(xì)胞的外泌液；

濃縮所述外泌液；

置換外泌液的緩沖液。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的外敷組合物，其特征在于，所述免疫細(xì)胞外泌體提取物的制備方法包括：

獲取臍帶血或外周血，通過淋巴細(xì)胞分離液獲取淋巴細(xì)胞；

將獲取的淋巴細(xì)胞用X-VIVO培養(yǎng)基重懸，將淋巴細(xì)胞的密度調(diào)整至1*10⁶/ml-1.5*10⁶/ml，添加GM-CSF 100ng/ml、IFN-γ200ng/ml和TNF-α20ng/ml進(jìn)行培養(yǎng)，第二天添加IL-1100ng/ml、IL-4 100ng/ml、IL-12 100ng/ml、IL-2 1000UI/ml；

第三天到第七天，每天通過添加含有IL-2 1000UI/ml和IL-15 1000UI/ml的X-VIVO培養(yǎng)基將細(xì)胞密度調(diào)整至1*10⁶/ml-1.5*10⁶/ml；

第七天到第十四天，每天通過添加培養(yǎng)基將細(xì)胞密度調(diào)整至1*10⁶/ml-1.5*10⁶/ml；

將第十四天的免疫細(xì)胞培養(yǎng)液300g-400g離心15分鐘-20分鐘，取上清液，將上清液在2000g-3000g繼續(xù)離心40-60min，取上清得到外泌液；

將外泌液用0.22μm孔徑過濾器進(jìn)行過濾，收集過濾液，過濾液經(jīng)濾膜孔徑為30-60nm的超濾裝置進(jìn)行濃縮；

超濾裝置內(nèi)加入PBS緩沖液，進(jìn)次超濾，重復(fù)3-5次；

用PBS緩沖液洗滌所述超濾裝置的濾膜，取洗滌液。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述的外敷組合物，其特征在于，所述外敷組合物的制備方法包括：

按比例配制各組份；

各組份加入水后，攪拌均勻；

將混合物在低溫低壓下蒸發(fā)；

將低溫低壓蒸發(fā)后的混合物冷凍并凍干。