[發明專利]用于確定多核苷酸的核苷酸序列的儀器和方法

在審

• 申請號: 202010565550.3
• 申請日: 2020-06-19
• 公開（公告）號: CN112111567A
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 顏銘宏;埃里克·斯塔瓦;拉賈戈帕·潘卡帕克森
• 申請（專利權）人: 伊魯米那股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869;C12M1/38;C12M1/34;C12M1/00
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 王瑋瑋;鄭霞

1.一種方法，所述方法包括：

使摻入試劑流動通過儀器的試劑管理系統和流動池，所述流動池具有定位于其中的第一多核苷酸，其中所述摻入試劑將第一堿基添加到堿基序列上，所述堿基序列包含與所述第一多核苷酸互補的第二多核苷酸；

在所述第一堿基已經被添加到所述第二多核苷酸上之后，捕獲從所述第一堿基發出的鑒定信號的圖像；

使裂解試劑流動通過所述試劑管理系統和所述流動池以從所述第一堿基去除第一終止劑，以便使所述堿基序列中隨后的堿基能夠被添加至所述第二多核苷酸；以及

使緩沖試劑以多于一個循環的連續正向流動方向和反向流動方向流動通過所述試劑管理系統和所述流動池。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述多于一個循環包括4個或更多個循環。

3.如權利要求1所述的方法，其中所述多于一個循環包括12個或更多個循環。

4.如權利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述試劑管理系統和所述流動池定位于所述儀器的盒中，所述盒能夠可移除地插入到所述儀器中。

5.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述摻入試劑、所述裂解試劑和所述緩沖試劑儲存于所述試劑管理系統的試劑孔中，所述試劑孔是可操作的以儲存有限總體積的每種試劑。

6.如權利要求1-5中任一項所述的方法，其中使所述緩沖試劑流動包括：

使第一正向流體積的所述緩沖試劑以所述多于一個循環的每個循環的所述正向流動方向流動；并且

使第二反向流體積的所述緩沖試劑以所述多于一個循環的每個循環的所述反向流動方向流動，所述第一正向流體積大于所述第二反向流體積。

7.如權利要求6所述的方法，其中所述正向流體積比所述反向流體積大約3％或更多。

8.如權利要求1-7中任一項所述的方法，其中使所述緩沖試劑流動包括：

在所述多于一個循環的最后一個循環后，使基本上沒有緩沖試劑流動通過所述試劑管理系統和所述流動池的孵育時間段持續約10秒或更長時間；以及

在所述孵育時間段后，使第三正向流體積的所述緩沖試劑以所述正向流動方向流動。

9.如權利要求8所述的方法，其中在使所述緩沖試劑流動期間，所述緩沖試劑的總掃過體積基本上由下式確定：((第一FFV+第二RFV)*N)+第三FFV，其中：

第一FFV是所述第一正向流體積，

第二RFV是所述第二反向流體積，

N是所述多于一個循環的總循環數，并且

第三FFV是所述第三正向流體積。

10.如權利要求9所述的方法，其中在使所述緩沖試劑流動期間，所述緩沖試劑的總流體消耗基本上由下式確定：((第一FFV-第二RFV)*N)+第三FFV。

11.如權利要求10所述的方法，其中所述緩沖試劑的總掃過體積與所述緩沖試劑的總流體消耗的比率為等于或大于約6。

12.如權利要求1-11中任一項所述的方法，其中對于正向流動方向和反向流動方向的所述多于一個循環的每個循環，以所述正向流動方向的流動和以所述反向流動方向的流動相隔約1秒或更短的延遲時間。

13.如權利要求1-11中任一項所述的方法，其中對于正向流動方向和反向流動方向的所述多于一個循環的每個循環，以所述正向流動方向的流動和以所述反向流動方向的流動相隔約200毫秒或更短的延遲時間。

14.如權利要求1-13中任一項所述的方法，其中正向流動方向和反向流動方向的所述多于一個循環的每個循環相隔約200毫秒或更短的延遲時間。