[發(fā)明專利]一種六價鉻的核酸適配體、核酸適配體衍生物及其用途

有效

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• 申請日: 2020-06-19
• 公開（公告）號: CN111676226B
• 公開（公告）日: 2021-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝丹平;賈文超;胡克梅;劉麗君;付建平;尹文華;黃忠輝
• 申請（專利權(quán)）人: 生態(tài)環(huán)境部華南環(huán)境科學研究所
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/53
• 代理公司: 北京律譜知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11457
• 代理人: 孫紅穎

本發(fā)明公開了一種六價鉻的核酸適配體、核酸適配體衍生物及其用途，六價鉻的核酸適配體序列為如下所示的DNA片段。該核酸適配體可以是各種同源性較高的類似序列或有本發(fā)明序列得到的衍生物。本發(fā)明的核酸適配體及其衍生物可用于環(huán)境、食品和生物有害因子的檢測、分離、純化及其他制品、制備六價鉻檢測探針等。具有能夠與六價鉻高特異性和高親合的結(jié)合力、能夠化學合成、性質(zhì)穩(wěn)定、分子量小、生物相容性好、易于保存等優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種核酸適配體、核酸適配體衍生物及其用途，具體涉及一種可結(jié)合六價鉻的核酸適配體、核酸適配體衍生物及其用途。

背景技術(shù)

六價鉻為吞入性毒物/吸入性極毒物，皮膚接觸可能導(dǎo)致過敏；更可能造成遺傳性基因缺陷，吸入可能致癌，對環(huán)境有持久危險性。六價鉻是很容易被人體吸收的，它可通過消化、呼吸道、皮膚及粘膜侵入人體。通過呼吸空氣中含有不同濃度的鉻酸酐時有不同程度的沙啞、鼻粘膜萎縮，嚴重時還可使鼻中隔穿孔和支氣管擴張等。經(jīng)消化道侵入時可引起嘔吐、腹疼。經(jīng)皮膚侵入時會產(chǎn)生皮炎和濕疹。危害最大的是長期或短期接觸或吸入時有致癌危險。國家對水中的鉻(Ⅵ)的排放有著嚴格的規(guī)定。目前，水中的六價鉻測定技術(shù)仍然以分光光度法為主，由于原子光譜測定六價鉻需要進行離子分離，導(dǎo)致步驟繁瑣和影響分析速度。因此，為了能夠快速、高效地檢測水質(zhì)中的六價格已成為一重大需求。

核酸適配體(aptamer)是通過指數(shù)富集配體進化的系統(tǒng)進化技術(shù)(SELEX)篩選得到的，能夠特異性結(jié)合靶標物質(zhì)的單鏈寡聚核苷酸(ssDNA或ssRNA)。核酸適配體與抗體功能類似，但是與抗體相比具有更多優(yōu)勢，如具有更高的親合力與特異性，無免疫原性，能夠化學合成、成本低、可進行標記、穩(wěn)定性好和易于保存等優(yōu)點。核酸適配體的靶分子更為廣泛，包括金屬離子、有機小分子、氨基酸、核酸、多肽、蛋白質(zhì)、細胞和組織等，并能從單一靶標擴展至完成的病毒顆粒及細胞等復(fù)合物靶標。

但是，目前尚未發(fā)現(xiàn)與六價鉻具有高親合力且低成本的核酸適配體。如果獲得一種六價鉻核酸適配體，將有望提供一種新的檢測六價鉻的手段和擴展應(yīng)用范圍。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種能夠與六價鉻高特異性和高親合力結(jié)合、能夠化學合成、生物相容性好、分子量小、穩(wěn)定、易于保存的六價鉻的核酸適配體、核酸適配體衍生物及其用途。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種六價鉻(Cr⁶⁺)的核酸適配體，其特征在于，所述核酸適配體的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示：

序列：

5’-CCACGCATAGGGCAAATCAAGCACACCCTCTAATGTTGCCTCTGATTCTGGCCTATGCGTGC-3’；

進一步地，所述核酸適配體的核苷酸序列上的某一位置被磷酸化、氧甲基化、甲基化、氨基化、巰基化、氟化或同位素化。

進一步地，所述核酸適配體的核苷酸序列上結(jié)合有生物素、地高辛、熒光物質(zhì)、納米材料、聚乙二醇、肽段、蛋白、酶或葉酸標記。

進一步地，所述核酸適配體衍生物所述核酸適配體的核苷酸序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架，或者是所述核酸適配體改造成的相應(yīng)鎖核酸或肽核酸。

進一步地，所述的核酸適配體衍生物在用于環(huán)境有害因子檢測中的用途。

本發(fā)明還提供了所述的核酸適配體衍生物在用于六價鉻分離與純化中的用途。

本發(fā)明還提供了核酸適配體衍生物在制備六價鉻類檢測探針中的用途。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：

(1)本發(fā)明的核酸適配體可以高親合力、高特異性地結(jié)合六價鉻，具有穩(wěn)定性好、無毒性、易于修飾等優(yōu)點，有利于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)及應(yīng)用。