[發明專利]檢測外周血外泌體circ-PPCDC的引物、試劑盒及其在胃癌肝轉移中的應用

在審

• 申請號: 202010565245.4
• 申請日: 2020-06-19
• 公開（公告）號: CN111549141A
• 公開（公告）日: 2020-08-18
• 發明（設計）人: 吳朝暉;范鈺;郎亞昆;鄒晨;朱寶平
• 申請（專利權）人: 江蘇華美健晟生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 王玉

本發明涉及檢測外周血外泌體circ?PPCDC的引物、試劑盒及其應用，試劑盒包括外周血外泌體樣本的RNA提取試劑、引物、去基因組DNA反應體系、逆轉錄反應體系、qPCR操作反應體系，本發明公開了circ?PPCDC在胃癌患者及正常人外周外泌體中的表達情況，并用熒光定量PCR檢測circ?PPCDC。外周血外泌體circ?PPCDC可用于胃癌肝轉移早期診斷，判斷疾病進展和預后情況，并可評價胃癌肝轉移的治療效果。

技術領域

本發明涉及檢測外周血外泌體circ-PPCDC的引物、試劑盒及其在胃癌肝轉移中的應用，屬于分子診斷技術領域。

背景技術

胃癌嚴重威脅著人類的健康,是全球五大癌癥之一,世界衛生組織統計報告顯示,2012年全球胃癌新發病約95.1萬例,死亡約72.3萬例。在東亞(特別是中國、韓國、蒙古和日本)、中歐、東歐、南美洲以及非洲大部分地區的胃癌發病率較高。中國是全世界胃癌發病率和死亡率最高的國家。全國腫瘤登記中心數據顯示,2015年在中國胃癌新發病約67.9萬例,死亡約49.8萬例,均高居我國惡性腫瘤第二位。早期胃癌難以診斷,病人在就診時大多處于中晚期,中晚期胃癌常常發生侵襲和轉移,嚴重影響胃癌患者的治療,五年生存率低于30％。肝臟是胃癌轉移的主要靶器官,肝轉移發生率高達44％,發生胃癌肝轉移的患者中可實行切除手術的極為有限,治療難度較大,胃癌肝轉移患者五年生存率僅10％左右。

胃癌易發生肝轉移,與肝臟的生物學特點密不可分。肝臟是人體最大的腺器,受肝門靜脈和肝動脈雙重血液供應,其中,肝門靜脈占80％,肝動脈占20％,消化道器官的血液均經肝門靜脈回流,肝臟具有豐富的血流量。肝毛細血管是多孔的血竇狀結構,具有很強的通透性,且肝竇導管缺乏皮下基底膜,與腦、肺和骨等其他器官相比,腫瘤細胞更加容易在肝臟發生外滲,所以肝臟是消化道腫瘤轉移最主要的器官。胃癌、結直腸癌及胰腺癌等均會通過血管轉移和淋巴回流等途徑首先轉移到肝臟。肝臟豐富的血管系統為腫瘤細胞的生長提供了充足的營養物質。除了血液循環系統的作用,胃癌細胞也容易與肝竇內皮細胞黏附。肝毛細血管可使大量的腫瘤細胞阻滯,腫瘤細胞與血管內皮細胞相互作用后,分泌細胞因子使血管內皮細胞收縮,促進腫瘤細胞侵出血管,以利于腫瘤細胞定植到肝實質組織中。

目前對胃癌肝轉移早期診斷仍是一大難題。已有一些腫瘤分子標志物應用于臨床早期檢測和輔助診斷,如癌胚抗原CEA、CA199、CA125、AFP等,但特異性仍較低。有報道稱CD44v6、OPN、YB-1、MAGE-A10等分子可能作為胃癌肝轉移潛在標志物,但仍待進一步驗證。因此，發現新的調控胃癌細胞肝轉移的腫瘤相關基因，不但有助于深入了解胃癌肝轉移發生發展的分子機制，補充和完善現有的細胞癌變理論體系，而且有助于鑒定新的胃癌肝轉移特異的生物標志物和藥物靶點，為胃癌肝轉移的預防、診斷、治療提供重要的理論依據。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的缺陷，提供一種檢測外周血外泌體circ-PPCDC的引物、試劑盒及其應用，外周血外泌體中的circ-PPCDC可用于胃癌肝轉移早期診斷，判斷疾病進展和預后情況，并可評價胃癌肝轉移的治療效果。

為解決上述技術問題，本發明提供一種檢測外周血外泌體circ-PPCDC的引物，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，其中，circ-PPCDC的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

本發明還提供一種檢測外周血外泌體circ-PPCDC的試劑盒，包括上述的引物。

進一步地，還包括外周血外泌體的RNA提取試劑、逆轉錄反應體系、qPCR反應體系。

進一步地，還包括去基因組DNA反應體系。

本發明還提供上述的引物或試劑盒在作為胃癌肝轉移監測試劑的應用。

進一步地，使用上述的引物或試劑盒檢測外周血外泌體中的circ-PPCDC。