[發明專利]一種pH調節自組裝抗菌肽及制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010564532.3
• 申請日: 2020-06-19
• 公開（公告）號: CN111777670B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 單安山;李丘軻;李金澤;丑淑麗
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;A61K38/16;A61P31/04
• 代理公司: 哈爾濱市哈科專利事務所有限責任公司 23101
• 代理人: 吳振剛

本發明公開一種pH調節自組裝抗菌肽及制備方法和應用，抗菌肽SAP的序列如SEQ ID No.1所示。設計含有疏水性氨基酸Trp和Val的組氨酸His功能化β折疊肽，His和Trp分別置于β?折疊結構相鄰的非氫鍵位點，呈對角線形式分布，其他氫鍵位點分別分布等量的His和Val，^DPro?Gly作為β?轉角連接β?折疊結構的兩端肽鏈。將該抗菌肽的凍干粉溶解于pH＝6.0的超純水中，抗菌肽單體在水溶液中充分自組裝成納米顆粒。該抗菌肽在制備治療在酸性環境下大腸桿菌感染性疾病藥物中的應用?？咕脑谒嵝原h境下發揮有效的抗菌作用，溶血毒性也較低，鹽離子穩定性較好，克服了的天然抗菌肽穩定性低的弱點。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種pH調節自組裝抗菌肽及制備方法和應用。

背景技術

抗生素的濫用和過度使用促進了多重耐藥菌在全世界廣泛傳播，導致沒有或僅有少數藥物能夠應用于臨床治療耐藥細菌感染，世界進入“后抗生素時代”，產生廣泛的社會和經濟影響，威脅到可持續發展目標的實現。因此應該在合理使用抗生素的同時開發新的抗菌藥物，特別是具有新的抗菌機制的藥物以應對多重耐藥菌給人類社會帶來的巨大的人員傷亡與財產損失。抗菌肽(AMPs)又稱宿主防御肽，能夠破壞細菌細胞膜完整性使得細菌內容物外流，導致細菌死亡，這種抗菌機制被認為不易引發細菌產生耐藥性，是抗生素有效替代品之一。但是天然抗菌肽生物相容性低，在生理條件下的穩定性低限制了它在臨床和畜牧中的應用。

發明內容

本發明的目的是提供一種pH調節自組裝抗菌肽SAP，是一種具有較高應用價值的自組裝抗菌肽。該抗菌肽能夠在超純水中自發組裝成納米顆粒。在pH為6.0的酸性環境中對病原菌尤其是大腸桿菌具有很好的殺滅效果，并且較好的生物相容性，而在pH為7.0時不具備抗菌活性。

本發明是通過以下技術方案實現的：一種pH調節自組裝抗菌肽SAP，序列如SEQ IDNo.1所示。

本發明的另一目的在于提供一種pH調節自組裝抗菌肽SAP的制備方法，如下：設計含有疏水性氨基酸Trp和Val的組氨酸His功能化β折疊肽，其中組氨酸His和疏水性氨基酸Trp分別置于β-折疊結構相鄰的非氫鍵位點，呈對角線形式分布，其他氫鍵位點分別分布等量的組氨酸His和纈氨酸Val，^DPro-Gly作為β-轉角連接β-折疊結構的兩端肽鏈，對肽段的C端酰胺化提高穩定性，利用固相合成法合成多肽，利用反相高效液相色譜純化和質譜鑒定合成肽；其序列如SEQ ID No.1所示。

本發明的另一目的在于公開將如上所述的抗菌肽SAP的凍干粉溶解于pH＝6.0的超純水中，室溫放置，抗菌肽單體在水溶液中充分自組裝成納米顆粒。

優選方法如下：將如上所述的抗菌肽SAP的凍干粉溶解于pH＝6.0的超純水中，超聲30min，室溫放置6-7天，抗菌肽單體在水溶液中充分自組裝成納米顆粒。

本發明的另一目的在于公開如上所述的pH調節自組裝抗菌肽SAP在制備治療在酸性環境下大腸桿菌感染性疾病藥物中的應用。

本發明具有以下優點及有益效果：通過本方法制備的抗菌肽能夠在不添加任何賦形劑的情況下在水中自發組裝成納米顆粒，通過pH的改變變換納米顆粒的形態影響抗菌活性。并且通過對其抗菌活性和生物安全性的檢測發現，其在酸性環境(pH＝6.0)中，對病原菌特別是大腸桿菌具有很好的抗菌效果，并且在與細胞共同培養時表現出很好的生物相容性，對哺乳動物細胞具有較低的毒性。并且在生理環境下仍能保持有效的抗菌效果。綜上所述，是一種具有較高應用價值的自組裝抗菌肽。

附圖說明

圖1是自組裝抗菌肽SAP在投射電鏡下觀察到的微觀形態圖；

圖2是自組裝抗菌肽SAP處理后大腸桿菌ATCC 25922的菌落數圖；

圖3是在生理鹽環境中自組裝抗菌肽SAP處理后大腸桿菌ATCC 25922的菌落數圖；