[發明專利]用于直接檢測蠶絲絲膠蛋白的多肽抗體及制備方法及應用

有效

• 申請號: 202010563917.8
• 申請日: 2020-06-19
• 公開（公告）號: CN111732657B
• 公開（公告）日: 2021-12-14
• 發明（設計）人: 劉春;張軒;程廷才
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;G01N33/68
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產權代理有限公司 51214
• 代理人: 易小藝

本發明屬于生物技術領域，涉及一種用于直接檢測蠶絲絲膠蛋白的多肽抗體及制備及應用，所述絲膠蛋白多肽抗體包括多肽一、多肽二、多肽三、多肽四、多肽五、多肽六和多肽七中一種或兩種以上，多肽一的氨基酸序列為SEQ ID NO.1所示，多肽二的氨基酸序列為SEQ ID NO.2所示，多肽三的氨基酸序列為SEQ ID NO.3所示，多肽四的氨基酸序列為SEQ ID NO.4所示，多肽五的氨基酸序列為SEQ ID NO.5所示，多肽六的氨基酸序列為SEQ ID NO.6所示，多肽七的氨基酸序列為SEQ ID NO.7所示。可對各樣蠶絲材料進行檢測，快速、直接、準確和靈敏，為絲膠蛋白的定性和定量檢測提供了實現的通道。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種用于直接檢測蠶絲絲膠蛋白的多肽抗體及制備方法及應用。

背景技術

蠶絲是一種天然高分子蛋白質纖維，主要分為家蠶絲和柞蠶絲兩大類。我國是最早利用柞蠶和放養柞蠶的國家，蠶絲是熟蠶結繭時分泌絲液凝固而成的連續長纖維，是一種天然纖維，也是人類利用最早的動物纖維之一。目前，從蠶絲中提取出的絲素和絲膠蛋白等物質被廣泛應用于醫藥、化工、食品等領域。

蠶絲主要由兩部分構成，包括絲膠和絲素，絲膠包裹和滲入兩根絲素就構成了一根蠶絲。絲膠和絲素雖均屬蛋白，但兩者的結構與氨基酸成份存有差異。絲素蛋白是蠶絲中主要的組成部分，約占質量的70％—73％，絲膠約占23％—25％。絲膠蛋白主要由絲膠蛋白1、絲膠蛋白2和絲膠蛋白3三個基因通過mRNA的選擇性拼接產生的至少8種分子量不同的蛋白質組成。其中，絲膠2主要存在于蠶最初吐出的網架上，在后期吐出的絲中，絲膠2的含量很少；絲膠3主要位于蠶絲絲膠的最外層，有很好的親水性；絲膠1是蠶絲絲膠的主要成分，位于絲膠的內層，緊貼絲素。絲膠蛋白的總體分子構象主要為無規卷曲狀，分子空間結構松散、含有無序β結構，但無α螺旋結構。絲膠蛋白鏈上有許多側鏈較長的氨基酸，如精氨酸賴氨酸、谷氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、酪氨酸等，以及許多極性親水基團(如-OH、-COOH、-NH2、NH等)處于多肽鏈表面，這些結構特征賦予絲膠蛋白優異的調濕、保濕作用，也很好的保護了內部的絲素成分。

蠶絲加工生產過程中，需要對生絲進行殘留絲膠蛋白脫去處理，以得到可用于絲綢生產的熟絲。在生絲去除殘留絲膠的過程中，常常需要使用相關化學試劑進行處理以精煉。但存在著不同批次的生絲因殘留的絲膠蛋白含量存在差異，需要配制的精煉試劑成分也不一樣，精煉過渡和精煉不足會分別造成內部絲素受損和大量絲膠殘留，影響熟絲品質的技術問題。且實際生產中，需要提高生產速率，常常會對不同批次或者不同來源的生絲使用同一種精煉試劑進行處理，這樣粗獷的處理方式常常導致精煉后的熟絲品質不均一，影響后期絲綢產品的質量。反過來，又會為了追求品質而浪費蠶絲，使廠家獲得的利潤變少。

絲織品流通過程中，也需要質檢，以檢測織物是否為真絲織品及達到質量要求。不同品種蠶絲或不同絲織品絲膠含量不盡相同，不同加工程度的蠶絲以及不同品種蠶絲其絲膠含量也存在差異，在市面上售賣的蠶絲也有真有假，蠶絲絲織品的質量也良莠不齊，有好有壞對蠶絲材料進行甄別鑒定，是需要也是個難題。

目前對絲膠蛋白的定性和定量檢測通過一些蛋白質的檢測手段來進行，例如BCA法定量檢測、凱氏定氮法檢測等，但難以勝任特異性檢測以及超靈敏檢測的需求。如凱氏定氮法檢測絲膠廢水回收實驗中的絲膠蛋白濃度，結果很容易受到廢水中其他含氮有機物的影響。也有采用蒸發水分法來計算絲膠蛋白的濃度，這種方法雖然操作簡單，但對于低濃度的絲膠蛋白溶液檢測能力有限且檢測結果容易受到水中其它雜質的影響。

利用絲膠蛋白抗體進行WB或者ELISA檢測可定性檢測絲膠蛋白。ELISA(酶聯免疫吸附測定)具有檢測靈敏度高、特異性強的特點，被廣泛應用于各種生化實驗之中。要完成ELISA實驗，需要合適的ELISA抗體。目前ELISA抗體種類豐富，卻難以滿足所有蛋白質的檢測。且絲膠蛋白成分復雜，難以分離；分子量大(100Kd),無法用原核表達的方式獲得。因此，市面上一直沒有可用于直接檢測絲膠蛋白的抗體。

發明內容