[發明專利]抗原M2-3E-GS及其產品和應用

有效

• 申請號: 202010562355.5
• 申請日: 2020-06-18
• 公開（公告）號: CN111560362B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 莊蘭芳;胡志強;儲迅濤
• 申請（專利權）人: 珠海麗珠試劑股份有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/68;G01N33/573;C12R1/19
• 代理公司: 北京超成律師事務所 11646
• 代理人: 高玉光

本發明涉及生物技術領域，具體而言，提供了一種抗原M2?3E?GS及其產品和應用。抗原M2?3E?GS，包括蛋白片段1、蛋白片段2和蛋白片段3，三者之間通過連接肽連接構成線性片段。該抗原避免了現有技術中AMA?M2檢測抗原存在空間位阻的問題，顯著降低了陽性漏檢率，準確性和特異性得到有效提高，同時抗原的穩定性較好，在生產過程中批間差較小。該抗原和與其相關的生物材料均可以用于制備診斷PBC或檢測AMA?M2產品，該產品的穩定性，準確性等性能也得到有效改善。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體而言，涉及一種抗原M2-3E-GS及其產品和應用。

背景技術

原發性膽汁性肝硬化(PBC)是一種病因不明的自身免疫性肝病，以肝內進行性小膽管破壞，伴匯管區和匯管周圍炎癥和纖維化為特點，其早期診斷是治療的關鍵，對各種自身抗體的檢測為其診斷提供重要依據。在PBC患者中，血清學特征主要是高滴度自身免疫性AMA-M2(抗線粒體抗體-M2型)抗體。

在體外診斷中，最重要的是選用抗原性強、特異性好的抗原。隨著分子生物技術不斷發展，許多AMA-M2的主要抗原基因被克隆表達、純化以用于PBC抗體檢測，包括丙酮酸脫氫酶復合體E2亞基(PDC-E2)、支鏈二酮酸脫氫酶復合體E2亞基(BCOADC-E2)、2-酮戊二酸脫氫酶復合體E2亞基(OGDC-E2)、二氫甲酰胺脫氫酶E3結合蛋白(E3BP)、丙酮酸脫氫酶復合體E1α(PDC-E1α)和丙酮酸脫氫酶復合體E1β亞基(PDC-E1β)。PBC患者針對PDC-E2、BCOADC-E2和OGDC-E2靶抗原的抗體陽性率分別為90％～95％、50％～80％和20％～60％，而針對E3BP、PDC-E1α和PDC-E1β靶抗原的抗體陽性率則較低。

臨床上用于AMA-M2檢測的方法較多，包括酶聯免疫吸附測定(ELISA)、線性免疫印跡法(LIA)、化學發光免疫分析(CLIA)和免疫熒光法(IF)等。目前商業化試劑盒所用的靶抗原多為PDC-E2、BCOADC-E2和OGDC-E2三種蛋白質的硫辛酰區域的融合重組蛋白(M2-3E)或是M2-3E與丙酮酸脫氫酶復合體(PDH)聯用。單純用PDC-E2為靶抗原進行檢測會漏診大約15％的AMA-M2陽性患者。若同時選用多種抗原混合物包被于固相載體進行檢測，又極易造成包被不均一，導致批間差異大。

M2-3E是將PDC-E2、BCOADC-E2以及OGDC-E2的硫辛酰基基團提取出來并將其拼接在一起得到的融合重組蛋白，通過將上述三個基團線性相連以降低漏檢率，然而，拼接后的融合蛋白容易造成空間位阻，特異位點被阻擋，特異性又變差。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種抗原M2-3E-GS。本發明的第二目的在于提供與上述抗原M2-3E-GS相關的生物材料。本發明的第三目的在于提供抗原M2-3E-GS的制備方法。本發明的第四目的在于提供抗原M2-3E-GS或生物材料的應用。本發明的第五目的在于提供一種診斷PBC的產品。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

一種抗原M2-3E-GS，所述M2-3E-GS包括蛋白片段1、蛋白片段2和蛋白片段3，三者之間通過連接肽連接構成線性片段；

所述蛋白片段1為SEQ ID NO.2所示氨基酸序列，或，與其具有90％以上同源性且具有相同功能的蛋白質；

所述蛋白片段2為SEQ ID NO.1所示氨基酸序列，或，與其具有90％以上同源性且具有相同功能的蛋白質；

所述蛋白片段3為SEQ ID NO.3所示氨基酸序列，或，與其具有90％以上同源性且具有相同功能的蛋白質；

連接肽為(GGGGSGGGS)_n，其中，n為1-5的整數，且蛋白片段1、蛋白片段2和蛋白片段3兩兩之間的連接肽相同或不同。