[發(fā)明專利]一種免提取滅活型病毒樣本核酸保存液及其制備方法與應用

在審

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• 申請日: 2020-06-18
• 公開（公告）號: CN111676216A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發(fā)明（設計）人: 黃服喜;劉松;李基君;陳香
• 申請（專利權）人: 合肥錸科生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/68;C12Q1/70
• 代理公司: 廣州獨角熊知識產(chǎn)權代理事務所(特殊普通合伙) 44580
• 代理人: 張小黎

本發(fā)明提供一種免提取滅活型病毒樣本核酸保存液及其制備方法與應用。該保存液安全無毒，使用簡單，無須冷鏈保存，可常溫運輸保存病毒樣本核酸長達3天，無須進一步滅活處理，保存液配置有病毒裂解組分、核酸酶抑制組分以及緩沖體系組分，病毒裂解組分可使病毒滅活裂解釋放出核酸，核酸酶抑制組分可抑制核酸酶活性，有效避免核酸降解，該核酸保存液無須進一步核酸提取純化操作即可直接進行核酸檢測，尤其適用于具有高度感染性的流行病毒的樣本核酸采集。

技術領域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學技術領域，具體涉及一種滅活型病毒樣本核酸保存液及其制備方法與應用。

背景技術

病毒是一種沒有細胞結構的特殊生物，由蛋白質外殼和內部的遺傳物質組成。病毒個體微小，結構簡單，只含一種遺傳物質(DNA或RNA)。病毒沒有代謝機構，沒有酶系統(tǒng)，不能獨立生存，只能寄生在宿主細胞內，依賴宿主細胞中的物質和能量完成生命活動，根據(jù)其包含的遺傳信息進行復制、轉錄、和轉譯，產(chǎn)生新一代病毒，實現(xiàn)復制式增殖。復制增殖后的新一代病毒可裂解原宿主細胞，感染新的宿主細胞進行下一輪復制式增殖。病毒性感染的潛在危害極大，例如新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)，該病毒是一種先前未在人類中發(fā)現(xiàn)的新型冠狀病毒，可導致急性感染性肺炎(COVID-19)，感染者初始癥狀多為發(fā)熱、乏力和干咳，后續(xù)逐漸出現(xiàn)呼吸困難，嚴重者可出現(xiàn)急性呼吸窘迫綜合征或膿毒癥休克，甚至死亡。

病毒性感染防控的最有效措施是早診早治，核酸檢測是針對病毒性感染快速診斷的主要方法，而病毒核酸樣品的獲取是核酸檢測的前提，保持病毒樣本中核酸穩(wěn)定的能力常常決定核酸檢測結果的準確性。然而病毒樣品核酸室溫下易降解，需儲存在冰點溫度以下來保持穩(wěn)定，但隨著時間的推移仍然會發(fā)生一定程度的降解，這不僅增加了樣本運輸和保存的成本，更限制了樣本采集點和診斷實驗之間的可能和距離，直接影響實驗檢測結果的準確性。

現(xiàn)有的病毒樣本采集和保存處理方法依賴冷鏈運輸，同時基于病毒活性的考慮，保存時間多為48小時內，且病毒樣本皆需提取核酸后方可核酸檢測。此類方法中病毒保存液多為等滲鹽溶液或磷酸鹽緩沖液，能在短時間內保存病毒的活性，但無法抑制核酸的降解。基于某些病毒的高度傳染性以及現(xiàn)有的核酸基因檢測需要，病毒樣本皆需高溫滅活處理，相關處理存在感染實驗人員的風險。而已有研究指出高溫滅活病毒的處理解會顯著降低可檢出的病毒核酸量(張沁欣et al.,2020)，同時后續(xù)病毒核酸提取操作步驟繁瑣，需要消耗核酸純化試劑，增加了檢測時間和成本。

因此有必要開發(fā)一種無須冷鏈、直接滅活病毒、抑制核酸酶的活性、穩(wěn)定保存病毒核酸、無須核酸提取即可直接進行核酸檢測的免提取滅活型病毒樣本核酸保存液。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明提供一種免提取滅活型病毒樣本核酸保存液及其制備方法與應用，該保存液無須冷鏈，可常溫運輸保存病毒樣本核酸長達3天，無須滅活處理，可直接滅活病毒，無須進一步核酸提取純化操作即可直接進行核酸檢測，適用于流行病毒樣本核酸采集。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明第一方面提供一種免提取滅活型病毒樣本核酸保存液，包括十二烷基硫酸鋰、N-十二烷酰肌氨酸、Tween-20、牛血清白蛋白、三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽、氧釩核糖核苷復合物、檸檬酸鈉。

本發(fā)明提供的免提取滅活型病毒樣本核酸保存液中，十二烷基硫酸鋰、N-十二烷酰肌氨酸為陰離子表面活性劑，Tween-20為非離子型表面活性劑，三者優(yōu)勢互補，利于病毒外殼蛋白裂解及核酸釋放到溶液中；牛血清白蛋白、三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽、氧釩核糖核苷復合物都可抑制核酸酶的活性，三者聯(lián)合進一步抑制核酸酶的活性；檸檬酸鈉起到螯合劑的作用的同時也提供一個合適的pH環(huán)境。上述各組分協(xié)同配合，即可實現(xiàn)無須冷鏈運輸、無須進一步滅活處理、無須進一步核酸提取純化即可進行核酸檢測的病毒樣本核酸保存效果。