[發(fā)明專利]局部微觀結(jié)構(gòu)可定量調(diào)控的三維凝膠及其制備和應用方法

有效

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• 申請日: 2020-06-18
• 公開（公告）號: CN111690590B
• 公開（公告）日: 2023-01-31
• 發(fā)明（設計）人: 朱曉璐;王鄭
• 申請（專利權(quán)）人: 河海大學常州校區(qū)
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;B01J13/00
• 代理公司: 南京縱橫知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32224
• 代理人: 嚴志平

1.一種局部微觀結(jié)構(gòu)可定量調(diào)控的三維凝膠的制備方法，其特征在于：包括如下步驟，

步驟S1、將液態(tài)蒸餾水和液態(tài)緩沖液與馬來酰亞胺-葡萄糖聚合物溶液混勻得到凝膠主干大分子溶液（01），將凝膠主干大分子溶液（01）分成兩部分，分別為體積為V1的主干大分子溶液第一部分（021）和體積為V2的主干大分子溶液第二部分（022），V1=V2；

步驟S2、制備物質(zhì)的量濃度小于100μM的含巰基RGD肽鏈，將主干大分子溶液第一部分（021）與體積為V3的含巰基RGD肽鏈水溶液混合均勻，室溫靜置5-6分鐘，孵育使其接枝得到產(chǎn)物一（031），將主干大分子溶液第二部分（022）與體積為V4的含巰基RGD肽鏈水溶液在另一管中混合均勻，室溫靜置5-6分鐘，并孵育使其接枝得到產(chǎn)物二（032），V3V4；

步驟S3、在產(chǎn)物一（031）中添加體積為V5的硫代甘油分子溶液，在產(chǎn)物二（032）中添加體積為V6的硫代甘油分子溶液，混勻后室溫靜置3-5分鐘，分別得到產(chǎn)物三（05）和產(chǎn)物四（06），V5V6，所述產(chǎn)物三（05）與產(chǎn)物四（06）具有不同數(shù)量的空置交聯(lián)位點；

步驟S4、將產(chǎn)物三（05）和產(chǎn)物四（06）在室溫下各自孵育2-10分鐘，然后再次混合在一起，得到混合物五（07）；

步驟S5、將細胞懸液加入混合物五（07）中，攪拌均勻，得到包含細胞（082）的前體溶液；

步驟S6、在容器內(nèi)底面添加交聯(lián)分子溶液（081），然后將包含細胞的前體溶液與交聯(lián)分子溶液（081）混合，則得到交聯(lián)密度非均勻且粘附肽鏈非均勻的三維凝膠（09）。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種局部微觀結(jié)構(gòu)可定量調(diào)控的三維凝膠的制備方法，其特征在于：所述步驟S1具體操作過程如下：

步驟S11、取出于-80℃溫度條件冷凍而呈固態(tài)的蒸餾水和碳酸鹽緩沖液，并在室溫下融解為液態(tài)，得到液態(tài)蒸餾水和液態(tài)碳酸鹽緩沖液；

步驟S12、取出于-80℃溫度條件冷凍而呈固態(tài)的馬來酰亞胺-葡萄糖聚合物，加入蒸餾水進行溶解，溶解時通過漩渦振蕩器進行振蕩，得到馬來酰亞胺-葡萄糖聚合物溶液；

步驟S13、將所述步驟S11中得到的液態(tài)蒸餾水和液態(tài)緩沖液與所述步驟S12中得到的馬來酰亞胺-葡萄糖聚合物溶液于離心管中混勻，得到凝膠主干大分子溶液（01）；

步驟S14、將所述步驟S13中得到的凝膠主干大分子溶液（01）分成兩部分，分別為體積為V1的主干大分子溶液第一部分（021）和體積為V2的主干大分子溶液第二部分（022）。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種局部微觀結(jié)構(gòu)可定量調(diào)控的三維凝膠的制備方法，其特征在于：所述步驟S2具體操作過程如下：

步驟S21、取出于-20℃或-80℃溫度條件下冷凍的含有巰基的RGD肽鏈固態(tài)物質(zhì)，加入蒸餾水進行溶解，溶解時通過漩渦振蕩器進行振蕩，得到含巰基RGD肽鏈水溶液；

步驟S22、在所述步驟S1中的主干大分子溶液第一部分（021）中添加體積為V3的含巰基RGD肽鏈水溶液，吹打混勻后，室溫靜置5-6分鐘，得到產(chǎn)物一（031）；

步驟S22、在所述步驟S1中的主干大分子溶液第二部分（022）中添加體積為V4的含巰基RGD肽鏈水溶液，吹打混勻后，室溫靜置5-6分鐘，得到產(chǎn)物二（032）。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種局部微觀結(jié)構(gòu)可定量調(diào)控的三維凝膠的制備方法，其特征在于：按步驟S21操作制備出多份不同濃度的含巰基RGD肽鏈水溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種局部微觀結(jié)構(gòu)可定量調(diào)控的三維凝膠的制備方法，其特征在于：所述步驟S3包括如下過程，

步驟S31、取出于-80℃溫度條件冷凍而呈固態(tài)的硫代甘油加蒸餾水進行溶解，溶解時通過漩渦振蕩器進行振蕩，得到硫代甘油分子溶液；

步驟S32、在所述步驟S2中的產(chǎn)物一（031）中添加體積為V5的硫代甘油分子溶液，吹打混勻后，室溫靜置T₀分鐘，得到產(chǎn)物三（05）；

步驟S33、在所述步驟S2中的產(chǎn)物二（032）中添加體積為V6的硫代甘油分子溶液，吹打混勻后，室溫靜置T₀分鐘，得到產(chǎn)物四（06）；

其中，3≤T₀≤5。