[發明專利]HIV-1病毒載量實時熒光定量PCR檢測特異性引物對、試劑盒

在審

• 申請號: 202010558549.8
• 申請日: 2020-06-18
• 公開（公告）號: CN111705164A
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發明（設計）人: 于斌;姜淼
• 申請（專利權）人: 北京良芯生物科技發展有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京國昊天誠知識產權代理有限公司 11315
• 代理人: 李瀟

本發明涉及生物分子檢測領域，具體涉及HIV?1病毒載量實時熒光定量PCR檢測特異性引物對、試劑盒。本發明提供了精確、簡便的用于人類免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV?1)RNA定量檢測的特異性引物對。利用一步法熒光定量RT?PCR技術檢測HIV?1病毒載量。該操作既確保了擴增結果的準確性，靈敏度，又縮短了時間、減少了污染，提高了熒光定量PCR檢測方法的簡便性，可用于HIV?1定量檢測，并且作為臨床對HIV?1感染的輔助診斷方法和臨床治療效果的監測手段。

技術領域

本發明涉及生物分子檢測領域，具體涉及HIV-1病毒載量實時熒光定量PCR檢測特異性引物對、試劑盒。

背景技術

人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)是誘發人獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired Immunodeficiency Syndrome,AIDS)的主要病原體，在分類學上屬于逆轉錄病毒科(Retroviridae)慢病毒屬(Lentivirus)。根據基因型的不同，HIV可以分為兩種類型：HIV-1與HIV-2。HIV-1有M、N、O、P四個不同的組(group)，每個組由獨立跨物種傳播所致。HIV-1具有較高的毒力，更容易傳播的同時也導致了全球絕大多數HIV感染。

全球所有HIV-1感染中，C亞型占46.6％。B亞型導致12.1％的感染，其次是A亞型、CRF02_AG、CRF01_AE、G亞型、D亞型。F、H、J、K亞型合計占感染的0.9％。其他流行重組類型(CRFs)占3.7％。

HIV-1感染后病毒載量的變化與艾滋病的發病進程有密切的相關性，HIV-1病毒載量的檢測可以預測艾滋病發生、發展以及預后。抗HIV-1病毒藥物的作用主要是抑制病毒的復制，降低病毒載量，因此，抗HIV的藥物若產生效果，感染者體內的病毒量就會下降。因此，病毒載量的檢測對疾病的監控、預防母嬰傳播以及觀察抗病毒藥物的療效都具有重要的意義。

核酸檢測已經成為了HIV實驗室診斷的發展方向，最近幾年核酸檢測技術發展迅速，主要是采用各種擴增放大技術提高檢測的靈敏度。隨著擴增技術的成熟，可以將低拷貝的靶序列成對數級放大擴增，同時采用比放射性探針更靈敏的非放射性檢測系統(如電化學發光系統等)，明顯提高核酸檢測的靈敏度，并減少放射性物質的污染，基于SYBR GreenⅠ熒光染色技術的熒光定量RT-PCR方法已發展成為成熟、常用而有效的檢測手段。

SYBR Green I是一種結合于所有dsDNA雙螺旋小溝區域的具有綠色激發波長的染料，并不與單鏈DNA鏈結合。在游離狀態下，SYBR Green I發出微弱的熒光，一旦與雙鏈DNA結合后，熒光大大增強。因此，在PCR體系中，隨著特異性PCR產物的指數擴增，每個循環的延伸階段，染料摻入雙鏈DNA中，其熒光信號強度與PCR產物的數量呈正相關，可以根據熒光信號檢測出PCR體系存在的雙鏈DNA數量。SYBR Green I的最大吸收波長約為497nm，發射波長最大約為520nm。SYBR Green I熒光染料法的優點有：可用于監測任何雙鏈DNA序列的擴增。信噪比高，樣品熒光信號強，背景信號低；使用方便，不影響其它修飾酶作用；價格便宜，無需探針，降低了檢測的設置和運行成本。

雖然HIV-1病毒各亞型的序列已公開，但是針對于個體感染人，序列的變化還是非常大的，因此僅基于已經公開的數據資料獲得的HIV-1病毒的保守序列所設計的引物難以廣泛適用，尤其不適于檢測中國特有的HIV-1感染者。

發明內容

為了解決上述問題提出并完成本發明。

本申請的目的是提供HIV-1病毒載量實時熒光定量PCR檢測特異性引物對。

本發明的再一目的是提供HIV-1病毒載量實時熒光定量PCR檢測試劑盒。

本發明實施例提供了HIV-1病毒載量實時熒光定量PCR檢測特異性引物對，所述引物對包括引物對1和引物對2，其中，