[發明專利]用于檢測FLT3-ITD基因突變的引物組、試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202010558362.8
• 申請日: 2020-06-18
• 公開（公告）號: CN113817811A
• 公開（公告）日: 2021-12-21
• 發明（設計）人: 周玲燕;黃濤;陳程;赫玉影;王黎;任濤
• 申請（專利權）人: 合肥中科普瑞昇生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 龍淳;葉占洋

1.用于檢測FLT3-ITD基因突變的引物組，其特征在于，所述引物組包括上游引物、下游引物和測序引物，其中所述上游引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示，所述下游引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:2所示，所述測序引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:3所示。

2.用于檢測FLT3-ITD基因突變的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的引物組。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，使用所述試劑盒時，所述上游引物和下游引物的終濃度各為0.1-1μM。

4.根據權利要求2或3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性對照品和陰性對照品，其中所述陽性對照品為FLT3-ITD基因突變陽性的細胞系的DNA，陰性對照品為不含有FLT3-ITD基因突變的體系。

5.權利要求1所述的引物組或權利要求2-4中任一項所述的試劑盒在對FLT3-ITD基因突變進行非疾病診斷目的的檢測中的應用。

6.一種利用Sanger法測序檢測FLT3-ITD基因突變的非疾病診斷目的方法，其包括以下步驟：

1)利用權利要求1所述的上游引物和下游引物對待測樣本DNA進行PCR擴增，獲得PCR產物；

2)利用權利要求1所述的測序引物和步驟1)獲得的PCR產物進行測序反應；

3)測序反應產物經純化、變性后測序，并獲得測序峰圖；

4)對測序峰圖進行分析，按照以下標準判斷待測樣本DNA中是否存在FLT3-ITD基因突變：

(A)若測序峰圖存在區別于背景信號的雙峰，則判定為待測樣本DNA中存在FLT3-ITD基因突變；

(B)若測序峰圖為單峰，當待測樣本的測序結果與野生型FLT3基因序列比對存在插入序列，則判定為待測樣本DNA中存在FLT3-ITD基因突變；當待測樣本的測序結果與野生型FLT3基因序列比對一致，則待測樣本DNA中不存在FLT3-ITD基因突變。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟1)獲得PCR產物之后，還包括對PCR產物進行凝膠電泳初步判斷待測樣本DNA中是否存在FLT3-ITD基因突變的步驟，判斷標準為：若凝膠電泳圖像出現兩條條帶，則初步判斷待測樣本DNA中存在FLT3-ITD基因突變；若凝膠電泳圖像僅出現一條條帶，則初步判斷待測樣本DNA中不存在FLT3-ITD基因突變。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟1)中所述PCR擴增的反應體系中上游引物和下游引物的濃度分別為0.1-1μM。

9.根據權利要求6-8中任一項所述的方法，其特征在于，步驟1)中所述待測樣本包括但不限于急性髓系白血病患者(AML)或骨髓增生異常綜合征(MDS)患者的骨髓或外周血臨床樣本、AML或MDS靶向藥物篩選模型細胞樣本、或人工構建的含FLT3-ITD基因突變的載體樣本。