[發明專利]用于測定胚胎質量的方法

在審

• 申請號: 202010558318.7
• 申請日: 2014-06-18
• 公開（公告）號: CN111549125A
• 公開（公告）日: 2020-08-18
• 發明（設計）人: S·阿瑪瑪;S·艾爾梅薩奧迪;A·希瑞;S·阿蘇
• 申請（專利權）人: 國家醫療保健研究所;蒙彼利埃大學;蒙彼利埃中央醫院大學;蒙彼利埃地區癌癥研究所
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 孟凡宏;袁森

本發明總體上涉及生殖醫學領域。更具體地，本發明涉及用于通過測定細胞游離的核酸水平和/或測定核酸提取物中至少一種特定核酸序列的存在和/或表達水平來測定胚胎質量的體外無創方法和試劑盒。

本申請是申請號為201480045819.8、申請日為2014年6月18日、發明名稱為用于測定胚胎質量的方法的申請的分案申請。

技術領域

本發明總體上涉及生殖醫學領域。更具體地，本發明涉及用于測定胚胎質量的方法和試劑盒。

背景技術

目前，在輔助生殖技術(ART)中沒有用于測定胚胎質量的可靠的可商購的遺傳或非遺傳的程序。尤其是，當轉移至合適的子宮環境時，測定胚胎是否能夠產生存活后代仍然是一個重要問題。另一個重要問題是測定將使胎兒以及甚至在孩子存活后發育的胚胎的基因譜。

選擇具有高移植潛力的胚胎是輔助生殖技術(ART)中的主要挑戰之一。最初，使用多胚胎移植(MET)來使懷孕率最大化。然而，胚胎質量的提高和多胎妊娠率的增加造成用于替代的胚胎數量減少。因此，選擇“最佳”胚胎成為關鍵，尤其強烈推薦使用選擇性單胚胎移植(SET)。因此，需要開發用于胚胎選擇的新的客觀的方法。在IVF和ICSI條件下選擇健康胚胎的傳統方法基于主觀的形態學標準，比如破碎化程度和多核的存在、卵裂球的數量和大小、早期胚胎分裂(Ebner等,2003；Fenwick等,2002)。然而，大多數研究表明，僅具有合適形態學外觀的胚胎不足以預測成功的移植。考慮到形態學評估和細胞遺傳學篩選方法的局限性，現在朝著更復雜、高通量的技術發展，出現“組學”科學，例如轉錄組學和代謝組學。這些方法關注各種身體細胞和胚胎培養基。我們的團隊使用卵細胞(CC)基因表達的轉錄組學數據已經報道了用于預測胚胎和妊娠結果的間接且具有吸引力的方法(Assou等,2011；Assou等,2008)。我們觀察到胚胎形態學方面和CC基因表達譜之間沒有關系(Assou等,2010)。其他研究報道，用Raman或近紅外(NIR)光譜檢測的舊培養基的代謝譜與個體胚胎的生殖潛能相關(Seli等,2007；Vergouw等,2008)。他們還表明，來自胚胎的培養基的代謝譜與形態學無關。

移植率降低的另一個主要原因是移植胚胎的遺傳質量差。例如，大多數胚胎損耗和損失由非整倍體(染色體數量異常)造成，所述非整倍體是致死的，且在所有自然流產和死胎的大約60％中出現。其他遺傳畸形包括染色體非整倍體、擴增、易位、插入/缺失、倒位、短串聯重復序列多態性、微衛星多態性、單核苷酸多態性(SNP)和其他結構異常。遺傳畸形可以導致很多表型疾病，一些甚至是致死的。如果遺傳畸形在胚胎中出現，可能發生很多類型的產前病癥和先天性疾病。通過著床前遺傳學診斷(PGD)篩選這些畸形非常重要，以確保選擇結構上正常的胚胎和存活移植。然而，目前的方法是創傷性的，可能對胚胎產生損害。

據報道，在生物液體例如血液、腹水、尿液、羊水、糞便、唾液或腦脊液中可以檢測到細胞游離的DNA。各種核酸，例如DNA、RNA、miRNA實際上是分離的，并且以細胞游離的形式被檢測到。發現cfDNA在健康受試者中是可檢測的量，且在一些病理性疾病(癌癥、心肌梗塞、自身免疫性疾病、膿毒癥、創傷……)或特殊生理狀態(緊張的工作……)中含量更高。cfDNA的釋放機制知之甚少，但已經表明可能涉及壞死、細胞凋亡、吞噬作用或主動釋放。CfDNA分析是診斷領域中的主動研究領域，尤其是兩個領域目前正經歷仔細審查。然而，還沒有研究用于測定胚胎質量的cfDNA檢測。

發明簡述

本發明是基于以下重大發現：培養基中存在一定量的細胞游離的核酸，其中胚胎在體外受精條件下生長。發明人表明，所述培養基中細胞游離的核酸的水平為胚胎引起懷孕的能力提供信息。此外，發明人表明，分析所述細胞游離的核酸使得檢測和表達特定序列的基因表達成為可能，為開發用于胚胎遺傳識別的無創方法作鋪墊。

發明詳述