[發(fā)明專利]一種誘導(dǎo)多能干細(xì)胞快速高效制備擬胚體的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010557662.4
• 申請日: 2020-06-18
• 公開（公告）號: CN111647552A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 阮光萍;姚翔;潘興華;龐榮清
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊第九二〇醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074
• 代理公司: 北京化育知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11833
• 代理人: 尹均利

1.一種誘導(dǎo)多能干細(xì)胞快速高效制備擬胚體的方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1.將多能干細(xì)胞在多能干細(xì)胞培養(yǎng)基中，進行培養(yǎng)多能干細(xì)胞團塊；

S2.將培養(yǎng)的多能干細(xì)胞通過消化劑消化為單個細(xì)胞或者較小的多能干細(xì)胞團塊；

S3.將消化后的多能干細(xì)胞按照1×10⁶的細(xì)胞數(shù)接種至直徑100mm的培養(yǎng)皿中，對干細(xì)胞繼續(xù)進行培養(yǎng)；

S4.將培養(yǎng)后的細(xì)胞進行過濾，去除雜質(zhì)；

S5.將過濾后的細(xì)胞利用微孔板材進行離心，經(jīng)過離心，形成緊壓的細(xì)胞群；

S6.將細(xì)胞群進行收集、聚攏，重懸于分化培養(yǎng)基中，使其形成較緊實的細(xì)胞球體；

S7.將細(xì)胞球體繼續(xù)培養(yǎng)，形成擬胚體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種誘導(dǎo)多能干細(xì)胞快速高效制備擬胚體的方法，其特征在于：所述多能干細(xì)胞培養(yǎng)基包括F12培養(yǎng)基、DMEM營養(yǎng)成分、碳酸氫鈉、硒酸鈉、胰島素生長因子、鐵蛋白、轉(zhuǎn)化生長因子。轉(zhuǎn)化生長因子，可以使多能干細(xì)胞多能性不變，而且細(xì)胞能夠正常生長。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種誘導(dǎo)多能干細(xì)胞快速高效制備擬胚體的方法，其特征在于：所述培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基為多功能干細(xì)胞培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)時間為2～4天，所述細(xì)胞通過細(xì)胞過濾篩網(wǎng)進行過濾，所述細(xì)胞通過細(xì)胞過濾篩網(wǎng)進行過濾。轉(zhuǎn)化生長因子，可以使多能干細(xì)胞多能性不變，而且細(xì)胞能夠正常生長。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種誘導(dǎo)多能干細(xì)胞快速高效制備擬胚體的方法，其特征在于：所述雜質(zhì)為培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)、死亡細(xì)胞、破碎細(xì)胞以及游離的單個細(xì)胞。轉(zhuǎn)化生長因子，可以使多能干細(xì)胞多能性不變，而且細(xì)胞能夠正常生長。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種誘導(dǎo)多能干細(xì)胞快速高效制備擬胚體的方法，其特征在于：所述離心通過離心機與微孔板材結(jié)合實現(xiàn)，轉(zhuǎn)速為700～1500r/min,所述離心時長為8～12分鐘。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種誘導(dǎo)多能干細(xì)胞快速高效制備擬胚體的方法，其特征在于：所述消化劑的材料為胰蛋白酶—乙二胺四乙酸消化液，所用濃度為0.1％～0.25％。