[發明專利]一種基于超高效液相色譜串聯高分辨質譜的細胞脂質組學分析方法

在審

• 申請號: 202010556568.7
• 申請日: 2020-06-17
• 公開（公告）號: CN111679026A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 邱靜;王昕璐;賈琪;錢永忠
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王煥

1.一種基于超高效液相色譜串聯高分辨質譜的細胞脂質組學分析方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將細胞用PBS調整密度至5×10⁵細胞/mL以上，進行超聲破碎，得到細胞懸液；將所述細胞懸液用甲醇-二氯甲烷溶液提取兩次，合并提取后的有機相，并用氮氣吹干，用復溶溶液復溶，通過濾膜后獲得待測樣品；

(2)將所述待測樣品通過超高效液相色譜-四極桿-靜電場軌道阱傅里葉轉換質譜進行分離和測定；

(3)利用Thermo Fisher Scientific Q-Exactive Plus System Xcalibur軟件和脂質化合物分析軟件Lipidsearch，結合母離子、二級碎片離子信息、保留時間信息與數據庫進行匹配，鑒定細胞中的脂質化合物；

(4)利用QI軟件分析不同種類細胞中脂質化合物的差異；

所述方法不使用標準品。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述甲醇-二氯甲烷溶液的體積比為1.5-3：0.8-1，優選地，所述甲醇-二氯甲烷溶液的體積比為2：1。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，復溶溶液選自甲醇或乙腈，優選甲醇；所述復溶溶液的體積為0.4-0.8mL，優選為0.5mL。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述濾膜為希波氏0.2μm PTFE濾膜。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(2)后，通過軟件Thermo XcaliburQual Browser確定數據采集情況。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高效液相色譜利用流動相A和流動相B進行梯度洗脫；

所述流動相A包括：乙腈和水、甲酸以及甲酸銨；

所述流動相B包括：乙腈和異丙醇、甲酸以及甲酸銨；

優選地，所述流動相A為體積比6:4的乙腈：水+0.1v/v％甲酸+10mM甲酸銨溶液；

所述流動相B為體積比1:9的乙腈：異丙醇+0.1v/v％甲酸+10mM甲酸銨溶液。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脫的程序為：

0～1.5min時，流動相B 40v/v％；

1.5～5min時，流動相B 40v/v％升至85v/v％；

5～14min時，流動相B 85v/v％升至97v/v％；

14～16min時，流動相B 97v/v％；

16～16.5min時，流動相B 97v/v％升至40v/v％；

16.5～21min時，流動相B 40v/v％。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高效液相色譜采用C18色譜柱進行，優選地采用Waters X-bridge C18色譜柱；更優選地，所述色譜柱長度為100mm，內徑為2.1mm，填料粒徑為3.5μm。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述質譜的條件選自a～d中的至少一個：

a.加熱電噴霧離子源，分別采用正、負模式采集；正、負離子模式下的電壓均為4.00KV；

b.離子傳輸管溫度為320℃；

c.鞘氣壓力分別為40psi和30psi，輔助氣壓力均為10arb，輔助氣加熱溫度均為300℃；

d.掃描模式為Full MS，儀器分辨率設置為70,000，-dd/MS2，分辨率17,500,NCE 30eV，掃描范圍200-1500m/z；

其中上述條件a～c中涉及的各個數值參數的浮動范圍為該數值參數±10％。

10.權利要求1-9中任一項所述的方法在不同細胞類型的脂質組學分析方面的應用。