[發明專利]骨膠原多肽-茶多酚絡合物的制備方法

在審

• 申請號: 202010555813.2
• 申請日: 2020-06-17
• 公開（公告）號: CN111567718A
• 公開（公告）日: 2020-08-25
• 發明（設計）人: 賈偉;姚峰;朱宏業;王俊青
• 申請（專利權）人: 江蘇特味濃生物技術開發有限公司
• 主分類號: A23L3/3526
• 分類號: A23L3/3526;A23B4/20;C07K14/78;C07K1/107
• 代理公司: 南京科知維創知識產權代理有限責任公司 32270
• 代理人: 許益民

1.一種骨膠原多肽-茶多酚絡合物的制備方法，其特征在于，其包括：

S1、制備骨膠原多肽純化液；

S2、制備茶多酚純化液；以及，

S3、按照體積混合骨膠原多肽純化液與茶多酚純化液，控制骨膠原多肽和茶多酚進行絡合反應形成骨膠原多肽-茶多酚絡合物；其中，

所述S1包括：

S11、浸提：將雞骨與水混合，脫血后升溫至110-115℃，恒溫3.5小時，得雞骨提取液；

S12、過濾：在壓力0.1～0.2MPa條件下，使用200目濾網對雞骨提取液進行過濾，得雞骨提取過濾液；

S13、離心：雞骨提取過濾液通過管式離心機離心分離移除雞油，得骨膠原蛋白液；

S14、濃縮：濃縮骨膠原蛋白液至其初始體積的1/10，得骨膠原蛋白濃縮液：

S15、酶解：加入復合蛋白酶至骨膠原蛋白濃縮液中酶解，得骨膠原多肽液；

S16、柱層析：將骨膠原多肽液通過葡聚糖凝膠分子篩進行純化、透析，收集得骨膠原多肽純化液；

所述S2包括：

S21、浸提：將新鮮茶葉沖洗干凈后與水混合，升溫至95～98℃，恒溫0.5小時，得茶葉提取液；

S22、過濾：使用200目濾網對茶葉提取液進行過濾，得茶葉提取過濾液；

S23、柱層析：茶葉提取過濾液通過聚酰胺-大孔樹脂分子篩進行純化、透析，收集得到茶多酚純化液；

所述S3中包括：

控制絡合反應的溫度35℃，恒溫40分鐘，冷卻至室溫，4℃冷藏2.5小時，離心分離得骨膠原多肽-茶多酚絡合物；其中，茶多酚純化液的體積是骨膠原多肽純化液的體積的3-5倍。

2.如權利要求1所述的骨膠原多肽-茶多酚絡合物的制備方法，其特征在于，所述S11中，雞骨與水的質量比為1:1.6-1.8，在45℃下脫血，并恒溫30分鐘。

3.如權利要求1所述的骨膠原多肽-茶多酚絡合物的制備方法，其特征在于，所述S15中，復合蛋白酶與骨膠原蛋白濃縮液的質量比為2:1000，其中，酶解條件為：以氫氧化鈣調節復合蛋白酶與骨膠原蛋白濃縮液的酶解液的pH為7.8～8.0，升溫至56-60℃，恒溫1小時，繼續升溫至95～100℃，保溫10分鐘，得骨膠原多肽液。

4.如權利要求1所述的骨膠原多肽-茶多酚絡合物的制備方法，其特征在于，所述S16中，收集的骨膠原多肽純化液中的骨膠原多肽的分子量為2KDa-10KDa。

5.如權利要求1所述的骨膠原多肽-茶多酚絡合物的制備方法，其特征在于，所述S16中，依據骨膠原多肽液水洗脫曲線，收集洗脫曲線中骨膠原多肽的目標分子量對應的洗脫峰的骨膠原多肽層析液。

6.如權利要求1所述的骨膠原多肽-茶多酚絡合物的制備方法，其特征在于，所述S21還包括：茶葉與水的質量比為1:10-1:12。

7.如權利要求1所述的骨膠原多肽-茶多酚絡合物的制備方法，其特征在于，所述S23還包括：先調節茶葉提取過濾液的pH為1.5，靜置4小時后過濾去除沉淀，用蒸餾水洗脫至中性后，用pH為2-4的5%乙醇溶液洗滌，再用60%乙醇溶液洗滌，收集茶多酚層析液得茶多酚純化液。