[發明專利]檢測rs9273471位點多態性的試劑及其應用

有效

• 申請號: 202010555270.4
• 申請日: 2020-06-17
• 公開（公告）號: CN111518894B
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發明（設計）人: 周智廣;謝志國;黃干;李霞;羅說明;林健;肖揚;夏影
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅二醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發明屬于分子生物學和醫學領域，涉及一種檢測rs9273471位點多態性的試劑及其應用。通過該位點基因型的檢測結果來預測成人隱匿性自身免疫糖尿病(LADA)患病風險或者預測區分LADA和2型糖尿病(T2DM)。本發明還公開了相應的檢測試劑盒，該試劑盒含有擴增rs9273471位點的引物以及檢測該位點基因型的引物。利用本發明檢測rs9273471位點的基因型，方法簡單易行,快速高效，成本低廉,為LADA的診斷和治療提供了一個簡捷的新途徑。

技術領域：

本發明涉及分子生物學和醫學領域，涉及人HLA基因單核苷酸多態性位點rs9273471的檢測試劑，及其在制備LADA相關性風險評估試劑中的應用。

背景技術：

成人隱匿性自身免疫糖尿病(LADA)是一種成人發病、存在糖尿病相關自身抗體、診斷后一段時間內不需要胰島素治療的自身免疫性糖尿病，是成人型自身免疫性糖尿病中最常見的一種，也可能是最常見的自身免疫性糖尿病。免疫方面，谷氨酸脫羧酶自身抗體是成人糖尿病患者最常見的自身抗體。

作為1型糖尿病(T1DM)的一種特殊亞型，LADA也是一種T細胞介導的自身免疫性疾病，其與胰島β細胞表面異常表達的HLA?II類抗原相關，HLA基因又稱為人類主要組織相容性復合體，位于第6對染色體的短臂上，整個復合體上有近60個基因座，根據編碼分子特性的不同，可將整個復合體的基因分成三類：I類、II類、III類。II類基因區位于著絲點的近端，是結構最為復雜的一個區，主要由DR、DQ、DP三個亞區構成，每個亞區又有若干個位點，其中本發明研究的rs9273471位點就是II類基因上DQ亞區的一個位點。CD4⁺的T細胞表面受體與HLA?II類分子與抗原肽形成的復合物結合，刺激輔助性T細胞分泌細胞因子等，從而參與LADA的發病過程。T細胞和抗原遞呈細胞浸潤胰島是一個漫長的過程，導致LADA的發病可在免疫反應發生后的數月至數年發生。

糖尿病是一種多因素疾病，是由環境和遺傳危險因素之間復雜的相互作用引起的。1型糖尿病(T1DM)和2型糖尿病(T2DM)的遺傳決定因素已經得到了廣泛的研究，而對成人隱匿性自身免疫糖尿病(LADA)的研究卻很少。為了最終實現治療LADA，本領域迫切需要尋求LADA的易感基因，并開發檢測LADA易感基因的方法、試劑盒，以及相關治療藥物。此外，由于臨床癥狀的相似，LADA患者常常被誤診為2型糖尿病。為了將LADA與其他類型的糖尿病區分開來，對LADA患者進行更加精準的治療，LADA的檢測與治療需要專門的策略。

發明內容：

本發明的首要目的是提供一種檢測rs9273471位點多態性的試劑在制備預測LADA患病風險制劑中的應用。該多態性位點是首次被發現與LADA患病風險相關，該位點基因型用于判定LADA患病風險，預測準確性高，可信度大。

進一步的，所述的rs9273471位點多態性為：AA,AG或GG。

本發明發現攜帶rs9273471GG基因型的人群中正常人人數遠高于LADA患者人數，提示GG基因型患者患LADA的風險低，另外兩種基因型AA和AG均以GG基因型為參比。

本發明以LADA病例和正常對照各500例左右進行統計學分析發現：rs9273471位點基因型為AA時，相對于基因型為GG的比值比OR為4.14，且p值小于0.05，具有顯著性差異。即攜帶rs9273471AA基因型的人群患LADA的風險顯著升高，是GG基因型人群患LADA風險的4.14倍；rs9273471位點基因型為AG時，相對于基因型為GG的比值比OR為1.31，但p值大于0.05，不具有顯著性差異，因此，rs9273471位點基因型為AG時，不足以判斷患LADA的風險。

進一步的，本發明得到的結論為：檢測對象rs9273471位點基因型為AA時，LADA患病風險高于基因型為GG。

進一步的，上述檢測rs9273471位點多態性的試劑可以預測以下幾種情形：