[發(fā)明專(zhuān)利]一種過(guò)氧化物酶酰基輔酶A氧化酶1的新用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010553869.4
• 申請(qǐng)日: 2020-06-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111544581B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳建國(guó);游蕾;鄔開(kāi)朗;劉映樂(lè);譚秋萍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣東龍帆生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61K38/44
• 分類(lèi)號(hào): A61K38/44;A61P31/14;C12N15/866;C12N15/62;C12N9/02;C12Q1/70;C12Q1/02;C12R1/93
• 代理公司: 北京金智普華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11401
• 代理人: 楊采良

本發(fā)明屬于抗病毒藥物技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了一種過(guò)氧化物酶酰基輔酶A氧化酶1的新用途，首先利用昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)在昆蟲(chóng)細(xì)胞SF9中表達(dá)ACOX1蛋白，然后使用鎳柱親和層析的方法對(duì)ACOX1蛋白進(jìn)行純化，最后在感染EV71的惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞RD細(xì)胞中來(lái)驗(yàn)證ACOX1蛋白的抗病毒效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明：純化后的ACOX1蛋白在一定濃度時(shí)可以在mRNA水平和蛋白水平抑制EV71病毒的復(fù)制。本發(fā)明從細(xì)胞和分子層面對(duì)過(guò)氧化物酶酰基輔酶A氧化酶1(ACOX1)抗EV71病毒的作用進(jìn)行了評(píng)價(jià)，為其進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用奠定了良好的基礎(chǔ)。表明該藥物具有開(kāi)發(fā)成為抗EV71病毒的有效藥物而應(yīng)用于臨床的前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于抗病毒藥物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種過(guò)氧化物酶酰基輔酶A氧化酶1的新用途。

背景技術(shù)

目前，人類(lèi)腸道病毒71型(Human?enterovirus，EV71)屬于小RNA病毒科(Picomaradae)腸道病毒屬(Enterovirus)。EV71病毒顆粒為正二十面體對(duì)稱(chēng)球形結(jié)構(gòu)，沒(méi)有包膜和刺突，其直徑在24–30nm左右。病毒基因組全長(zhǎng)為7408bp，為單鏈正義RNA，基因組中只有一個(gè)開(kāi)放閱讀框(ORF)，在ORF的兩側(cè)為5’和3’的非編碼區(qū)(UTRs)，在基因組的3’端末尾還有一個(gè)長(zhǎng)度可變的多聚腺苷酸尾巴(poly-A)。病毒基因組中的ORF可以編碼2194個(gè)氨基酸，這些氨基酸組成的多聚蛋白可以產(chǎn)生P1、P2和P3一共3個(gè)前體蛋白。其中P1前體蛋白編碼4個(gè)病毒外殼蛋白，分別為VP1、VP2、VP3和VP4；P2和P3前體蛋白一共編碼7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白。其中，VP1蛋白是最主要的衣殼蛋白，含有EV71主要的抗原決定簇，其編碼的基因序列與病毒的血清學(xué)有很高的相關(guān)性，因此常常被用來(lái)作為病毒型別的鑒定和基因的進(jìn)化分析。病毒粒子的衣殼有60個(gè)亞單位組成，每一個(gè)亞單位都有VP1-VP4形成的五聚體樣結(jié)構(gòu)，其抗原決定簇基本上都位于VP1-VP3上。

EV71病毒以人體的上呼吸道、咽喉以及腸道為侵入對(duì)象，先在局部的黏膜和扁桃體及咽等淋巴組織和腸道淋巴結(jié)集合并初步的擴(kuò)增，然后將EV71病毒釋放入血液，形成第一次病毒血癥，EV71病毒隨血液擴(kuò)散到帶有其受體的靶組織，再次增殖從而引起第二次病毒血癥和一些臨床癥狀。EV71的感染會(huì)造成長(zhǎng)期的后遺癥，例如神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥以及認(rèn)知功能的延遲和降低。肺水腫和出血是兒童感染EV71后引起死亡的主要原因。

目前并沒(méi)有有效的抗病毒藥物來(lái)治療重癥的EV71感染，也沒(méi)有進(jìn)入臨床階段的疫苗可以使用，所以，避免接觸感染的患者和疑似感染患者是預(yù)防EV71感染的主要方法。在抗EV71藥物的研究方面，吡啶基咪唑啉酮是一類(lèi)新型粘合劑類(lèi)的藥物，它可以與EV71的VP1蛋白的相互作用，通過(guò)使VP1基因的疏水區(qū)域的擴(kuò)大，從而干擾VP1與其受體結(jié)合的方法來(lái)抑制EV71的復(fù)制。另外，細(xì)胞因子介導(dǎo)的方法可以用來(lái)治療EV71感染所引起的水腫，例如像利巴韋林就能通過(guò)降低感染小鼠組織中的病毒載量來(lái)降低EV71感染的死亡率和后續(xù)的麻痹后遺癥。最后，可以通過(guò)接種疫苗的方法來(lái)預(yù)防EV71的感染，目前EV71的候選疫苗主要包括減毒活性疫苗、基因工程疫苗、DNA疫苗、病毒樣顆粒以及轉(zhuǎn)基因疫苗，這些疫苗已在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中得到評(píng)估但是臨床試驗(yàn)尚未進(jìn)行。

過(guò)氧化物酶酰基輔酶A氧化酶1(Peroxisomal?acyl-coenzyme?A?oxidase?1，ACOX1)是過(guò)氧化物酶體(Peroxisome)的重要組分，是脂肪酸β氧化過(guò)程中的關(guān)鍵限速酶。過(guò)氧化物酶體是真核生物中普遍存在的細(xì)胞器，對(duì)過(guò)氧化氫的降解至關(guān)重要。過(guò)氧化物酶體中含有多種生成或降解ROS/RNS的酶，對(duì)于維持細(xì)胞內(nèi)氧化平衡是至關(guān)重要的。在大腦中，過(guò)氧化物酶體的主要作用之一是降解長(zhǎng)鏈脂肪酸(VLCFA)，如C24:0和C26:0。