[發明專利]一種雙層微流控芯片、檢測新型冠狀病毒的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202010553454.7
• 申請日: 2020-06-17
• 公開（公告）號: CN113025476A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 韓琳;強樂;張宇;劉宏;王敏
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12M1/00;C12Q1/70;C12Q1/6816;B01L3/00
• 代理公司: 青島華慧澤專利代理事務所(普通合伙) 37247
• 代理人: 馬千會

1.一種雙層微流控芯片，其特征在于：該芯片包括加樣層和檢測層，所述加樣層上設有至少兩個加樣口；所述檢測層上設有檢測腔、出樣口；所述檢測腔與所述加樣口通過進樣微流道連接；所述出樣口與所述檢測腔通過出樣微流道連接。

2.根據權利要求1所述的雙層微流控芯片，其特征在于：每個加樣口與檢測腔之間連接一條進樣微流道。

3.根據權利要求1所述的雙層微流控芯片，其特征在于：每個芯片設置10-50個檢測單元。

4.一種檢測新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于：包括權利要求1-3任一項所述的雙層微流控芯片、含有RdRP基因熒光探針及E基因熒光探針的檢測溶液、冠狀病毒標準溶液、納米材料溶液和陽離子溶液。

5.根據權利要求4所述的檢測新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于：所述含有RdRP基因熒光探針及E基因熒光探針的檢測溶液由緩沖液、0.5～21μM的3’端熒光分子標記的RdRP基因熒光探針及E基因熒光探針混合而成。

6.根據權利要求4所述的檢測新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于：所述的納米材料選自納米金顆粒、納米石墨烯或納米氧化石墨烯材料、納米硫化鎢、納米硒化鎢中的任一種，其濃度為2～50ug/mL。

7.根據權利要求4所述的檢測新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于：所述陽離子溶液中，各組分的濃度為：2.5 mM氯化鎂,0.5 mM氯化鈣，0.5 mM 氯化鈉，0.05 mM 硝酸鈉，0.05mM 磷酸氫鈉，0.01 mM 氯化鐵，0.01 mM 硫酸銅，0.01 mM 硫酸鋅，0.01 mM 氯化鈷，0.01mM 氯化錳。

8.根據權利要求4所述的檢測新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒還包括沖洗液，所述沖洗液為濃度0.05%的檸檬酸鈉溶液。

9.一種檢測新型冠狀病毒的方法，其特征在于，包括：

（1）從其中一個加樣口注入含有RdRP基因熒光探針及E基因熒光探針的檢測溶液、納米材料溶液、陽離子溶液到檢測腔中，此時DNA探針被納米材料吸附，熒光淬滅；

（2）將冠狀病毒待測溶液從另一個加樣口注入，使其進入到檢測腔中；

（3）將芯片置于室溫～60℃孵育5～40分鐘后，對檢測腔中的熒光信號進行檢測，并記錄熒光值；

（4）根據病毒標準溶液梯度濃度及熒光強度，計算標準線性回歸方程；

（5）將測定的待測溶液的熒光強度，代入所述的標準線性回歸方程，計算出待測溶液中新型冠狀病毒基因的濃度。

10.一種檢測新型冠狀病毒的方法，其特征在于，包括：

（1）從不同的加樣口分別注入含有RdRP基因熒光探針及E基因熒光探針的檢測溶液和冠狀病毒待測溶液，兩種溶液進入到檢測腔中，在室溫～60℃孵育5～40分鐘；

（2）將納米材料溶液從加樣口注入，使其進入到檢測腔中；

（3）對檢測腔中的熒光信號進行檢測，并記錄熒光值；

（4）根據病毒標準溶液梯度濃度及熒光強度，計算標準線性回歸方程；

（5）將測定的待測溶液的熒光強度，代入所述的標準線性回歸方程，計算出待測溶液中新型冠狀病毒基因的濃度。