[發明專利]一種DNA分子及其應用和獲得高根量苧麻植株的方法

有效

• 申請號: 202010552855.0
• 申請日: 2020-06-17
• 公開（公告）號: CN111575292B
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 高鋼;朱愛國;喻春明;陳平;陳坤梅;王曉飛;陳繼康
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院麻類研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/84;C12N1/21;A01H4/00;A01H5/06;A01H6/84
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎

1.一種DNA分子，其特征在于，所述DNA分子的堿基序列如SEQ ID NO：3所示，其為將苧麻BnWOX8基因5’端非翻譯區翻譯起始位點上游的2000～2500bp序列替換為SEQ ID NO：1的序列。

2.根據權利要求1所述的DNA分子，其特征在于，所述苧麻BnWOX8基因的編碼序列如SEQID NO：2所示。

3.權利要求1或2所述DNA分子在制備高根量苧麻植株中的應用。

4.一種重組表達載體，其特征在于，其包含權利要求1或2所述DNA分子。

5.一種重組農桿菌菌株，其特征在于，其包含權利要求4所述重組表達載體。

6.一種獲得高根量苧麻植株的方法，其特征在于，包括如下步驟：

將苧麻BnWOX8基因5’端非翻譯區翻譯起始位點上游的2000～2500bp序列替換為SEQID NO：1的序列，得到經過修飾的DNA分子；所述苧麻BnWOX8基因的編碼序列如SEQ ID NO：2所示；

將經過修飾的DNA分子與表達載體連接，得到重組表達載體；

將重組表達載體轉化入農桿菌，得到重組農桿菌菌株；

制備苧麻愈傷組織，將重組農桿菌菌株轉化入苧麻愈傷組織，經過分化培養、生根培養，得到高根量苧麻植株。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述制備苧麻愈傷組織所用愈傷分化培養基為：MS+0.1～1.0mg/L TDZ+0.01～0.1mg/L 2,4-D+0.005～0.015mg/L IAA。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述分化培養所用愈傷分化培養基為：MS+0.1～1.0mg/L TDZ+0.01～0.1mg/L 2,4-D+0.005～0.015mg/L IAA+100～1000mg/L羧芐青霉素+10～100mg/L卡那青霉素。

9.根據權利要求6至8中任一項所述的方法，其特征在于，所述生根培養所用生根培養基為：MS+0.005～0.015mg/LNAA。

10.一種獲得高根量苧麻植株的方法，其特征在于，包括如下步驟：

將苧麻BnWOX8基因5’端非翻譯區翻譯起始位點上游的2000～2500bp序列替換為SEQID NO：1的序列，得到經過修飾的DNA分子；所述苧麻BnWOX8基因的編碼序列如SEQ ID NO：2所示；

將經過修飾的DNA分子與表達載體連接，得到重組表達載體；

制備苧麻原生質體細胞，利用PEG介導轉化法將重組表達載體轉入原生質體細胞中，經培養，得到愈傷組織；

愈傷組織經過分化培養，篩選得到高根量苧麻植株。