[發明專利]一種黃曲霉毒素電化學傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 202010552826.4
• 申請日: 2020-06-17
• 公開（公告）號: CN111678962B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 李月云;禹曉東;李新進;徐振;張津津;霍之林
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N27/327;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種黃曲霉毒素電化學傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下：

（1）將直徑為4 mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉打磨成鏡面，超純水清洗干凈；

（2）將6 μL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的AuPt納米粒子溶液滴涂于上述電極表面，室溫下晾干，超純水沖洗電極表面，晾干；

（3）繼續將6 μL、8 ~ 12 μg/mL的黃曲霉毒素捕獲抗體Ab₁滴加到電極表面，超純水沖洗，4 ℃冰箱中干燥；

（4）繼續將3 μL、0.5 ~ 1.5 mg/mL、質量分數為1%的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到電極表面，以封閉電極表面上的非特異性活性位點，超純水沖洗電極表面，除去未結合的BSA，4℃冰箱中晾干；

（5）繼續滴加6 μL、10 pg/mL ~ 60 ng/mL的一系列不同濃度的黃曲霉毒素抗原溶液，超純水沖洗電極表面，4℃冰箱中晾干；

（6）繼續滴加6 μL、1.5 ~ 3.5 mg/mL的檢測抗體孵化物Au/Cu_xO@CeO₂-Ab₂溶液于電極表面，置4 ℃冰箱中孵化40 min、超純水沖洗、晾干，制得一種黃曲霉毒素電化學傳感器；

所述AuPt納米粒子溶液的制備，步驟如下：

（1）AuPt納米粒子的制備

在1.0 mL超純水中依次加入50 ~ 150 mg泊洛沙姆F127、20 ~ 40 mg碘化鉀，攪拌均勻；加入0.8 mL、10 ~ 30 mmol/L氯鉑酸、2.5 mL、10 ~ 30 mmol/L氯金酸，攪拌均勻；加入2.5 mL、0.05 ~ 0.15 mol/L抗壞血酸，90 ℃反應15 min；超純水和乙醇分別離心清洗三次，60 ℃干燥12 h，制得AuPt納米粒子；

（2）AuPt納米粒子溶液的制備

將5 ~ 15 mg AuPt納米粒子分散到在5 mL超純水中，超聲10 min，制得AuPt納米粒子溶液；

所述檢測抗體孵化物Au/Cu_xO@CeO₂-Ab₂溶液的制備，步驟如下：

（1）Au/Cu_xO@CeO₂的制備

將100 mL、0.01 mol/L氯化銅溶液，置于55 ℃水浴中；加入10 mL、2 mol/L氫氧化鈉溶液，反應30 min；再加入10 mL、0.6 mol/L抗壞血酸，反應3 h；超純水和乙醇分別離心清洗三次，60 ℃真空干燥5 h，制得Cu₂O立方；

在30 mL超純水中加入20 ~ 40 mg Cu₂O立方，攪拌均勻，加入500 ~ 700 μL、0.1 mol/L硝酸鈰，加熱至60 ℃；加入3.0 ~ 4.0 mL、0.15 mol/L氨水，反應3 h；加入55 ~75 μL、20mmol/L氯金酸，反應15 min；加入65 μL、20 mmol/L檸檬酸鈉，反應30 min；超純水離心清洗三次，60 ℃真空干燥8~12 h，制得Au/Cu_xO@CeO₂；

所述氯化銅溶液是在100 mL超純水中加入0.14g氯化銅，攪拌5 min而制得；

（2）檢測抗體孵化物Au/Cu_xO@CeO₂-Ab₂溶液的制備

將1.0 ~ 3.0 mL濃度為2 mg/mL的Au/Cu_xO@CeO₂溶液加入到0.5 ~ 1.5 mL濃度為10 μg/mL的黃曲霉毒素檢測抗體溶液Ab₂中，4 ℃恒溫振蕩箱中震蕩孵化12 h，離心洗滌，加入1.0 ~ 3.0 mL、pH = 7.38的磷酸緩沖溶液中，制得檢測抗體孵化物Au/Cu_xO@CeO₂-Ab₂溶液，4 ℃下保存備用。

2.如權利要求1所述的一種黃曲霉毒素電化學傳感器的制備方法，其特征在于，所述黃曲霉毒素選自下列之一：黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素G1。