[發明專利]一種美登木素衍生物及其合成方法和應用

在審

• 申請號: 202010551651.5
• 申請日: 2020-06-17
• 公開（公告）號: CN111635418A
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發明（設計）人: 沈月毛;魯春華;李小曼
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C07D498/08
• 分類號: C07D498/08;A61K31/537;A61P35/00;C12P17/18;C12N15/74;C12N15/55;C12R1/01
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 王素平

1.一種美登木素衍生物，其特征在于，化學結構如下所示：

2.如權利要求1所述美登木素衍生物的合成方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)用YMG培養基對表達有丙氨酰化酶的珍貴橙色束絲放線菌(Actinosynnemapretiosum ssp.autantium ATCC 31565)的突變株HGF052+pJTU824-asm18+pSBT11-astC進行15L固體發酵，28-30℃培養7-10天；

(2)將培養物切成小塊，室溫下用體積比80:20的乙酸乙酯/甲醇浸泡提取三次，合并提取液，減壓及38-40℃的溫度下濃縮至干，得粗提物；

(3)用水溶解粗提物，使用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相減壓及38-40℃的溫度下濃縮至干得EA提取物；

(4)EA提取物溶于甲醇，再經石油醚多次萃取，甲醇相減壓及38-40℃的溫度下濃縮至干得甲醇提取物；

(5)甲醇提取物依次經反相硅膠柱層析分離，凝膠柱層析分離，薄層層析和制備型HPLC分離將組分相同的洗脫液進行合并得到美登木素衍生物。

3.如權利要求2所述美登木素衍生物的合成方法，其特征在于，步驟(1)中，所述表達有丙氨酰化酶的珍貴橙色束絲放線菌突變株HGF052+pJTU824-asm18+pSBT11-astC的制備方法按如下步驟所述：

(a)將丙氨酰化酶基因astC的開放閱讀框插入到質粒pSBT11上的Ned I和EcoR I限制性酶切位點之間，使該核苷酸序列位于ermE*啟動子的下游并受其調控；

(b)用整合型表達載體pSBT11-astC轉化大腸桿菌ET12567/pUZ8002，獲得大腸桿菌-放線菌接合轉移供體菌ET12567/pUZ8002/pSBT11-astC；

(c)將ET12567/pUZ8002/pSBT11-astC與HGF052+pJTU824-asm18的菌絲體進行接合轉移，獲得表達有丙氨酰化酶的突變株HGF052+pJTU824-asm18+pSBT11-astC。

4.如權利要求2所述美登木素衍生物的合成方法，其特征在于，步驟(1)中，對表達有丙氨酰化酶的珍貴橙色束絲放線菌(Actinosynnema pretiosum ssp.autantium ATCC31565)的突變株HGF052+pJTU824-asm18+pSBT11-astC進行固體發酵，28℃培養10天。

5.如權利要求2所述美登木素衍生物的合成方法，其特征在于，步驟(4)中，所述提取采用的甲醇為95％甲醇。

6.如權利要求2所述美登木素衍生物的合成方法，其特征在于，步驟(5)中，所述反相硅膠柱、制備型HPLC柱填料為C-18、凝膠柱型號為Sephadex LH-20。

7.如權利要求2所述美登木素衍生物的合成方法，其特征在于，步驟(5)中，對甲醇提取物進行分離的步驟為：

甲醇提取物首先經反相硅膠柱層析分離，分別用水，30％，50％，70％，100％甲醇依次洗脫，每個組分洗脫1L，200mL/份接收，TLC檢測，用CH₂Cl₂：MeOH＝10:1v/v展開，碘化鉍鉀顯色，合并70％洗脫組分；繼續用凝膠柱層析分離，甲醇洗脫，5mL/管,合并25-29管；繼續用制備型HPLC分離，流動相為體積百分比38％乙腈，收集目標峰，得到美登木素衍生物1。

8.權利要求1所述美登木素衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應用。

9.如權利要求8所述美登木素衍生物的應用，其特征在于，所述的腫瘤為宮頸癌、結腸癌或乳腺癌。

10.一種抗腫瘤的藥物組合物，其特征在于，包括權利要求1所述美登木素衍生物和一種或多種藥學上可接受載體或賦形劑。