[發明專利]構建體及其應用

有效

• 申請號: 202010550858.0
• 申請日: 2020-06-16
• 公開（公告）號: CN111635913B
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發明（設計）人: 張旭輝;寧維瑜;何亮亮;羅顯麟;洪強;趙光輝;顏青青;唐銳華;李曉平;郭林峰;陳超;葉群瑞;陳小鋒;李文佳
• 申請（專利權）人: 廣東東陽光藥業有限公司
• 主分類號: C12N15/869
• 分類號: C12N15/869;C12N15/19;C12N7/01;C12N5/10;A61K48/00;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 肖陽

本發明提出了一種構建體及其應用。該構建體的載體來源于HSV，所述構建體攜帶趨化因子編碼框，所述趨化因子編碼框設置于UL23基因位置，并與啟動子可操作地連接。根據本發明實施例的構建體可持續高表達趨化因子。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地，本發明涉及構建體及其應用，更具體地，本發明涉及構建體、HSV病毒、轉基因細胞、藥物組合物以及制藥用途。

背景技術

CCL19趨化因子，表達在免疫細胞和內皮細胞的細胞膜上，在趨化樹突狀細胞、CD4+和CD8+T細胞浸潤腫瘤，介導免疫細胞釋放細胞因子，抑制腫瘤增殖、遷移和侵襲以及協助治療腫瘤過程中發揮關鍵作用。受體是CCR7，CCR7表達于DC細胞、巨噬細胞、T細胞和許多腫瘤組織。

將抗腫瘤藥物與CCL19聯用有助于找到新的腫瘤治療手段和基因疫苗。

發明內容

本發明是基于發明人對以下問題的認識和發現所作出的：

發明人發現，CCL19的臨床應用受到極大地限制。首先CCL19的穩定性較低，例如CCL19在酸性條件下會發生降解，以及在溫和變性條件下也會發生不可逆地聚集，而導致生物活性的喪失。其次，當靜脈內給藥時，CCL19會迅速從血液中清除，需要頻繁重新給予高濃度的CCL19，以在靶位點引起有效反應，但這會導致全身毒性和副作用，如發燒，疲勞，惡心，嘔吐，腹瀉，神經毒性和白細胞減少。

本申請旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。

為此，在本發明的第一方面，本發明提出了一種構建體。根據本發明的實施例，所述構建體的載體來源于HSV，所述構建體攜帶趨化因子編碼框，所述趨化因子編碼框設置于UL23基因位置，并與啟動子可操作地連接。發明人在實驗中意外而驚喜地發現，當趨化因子編碼框設置于HSV載體的UL23基因位置時，構建體可持續高表達趨化因子，趨化巨噬細胞、淋巴細胞、NK細胞等免疫細胞，HSV病毒在腫瘤細胞內復制能力不受影響的前提下，對于腫瘤細胞的殺傷力顯著增高。

根據本發明的實施例，上述構建體還可以進一步包括如下附加技術特征至少之一：

根據本發明的實施例，所述趨化因子為CCL19。根據本發明實施例的構建體對持續高表達趨化因子CCL19的效果更加顯著。

根據本發明的實施例，CCL19基因編碼框設置于UL23基因序列的第387-521位核苷酸之間。需要說明的是，本申請描述的UL23基因序列編碼是以UL23基因起始密碼子的第一位核苷酸為第1位進行順序編碼的，UL23基因的序列可參考https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NC_001806.2？report＝genbankfrom＝46609to＝47803strand＝true。根據本發明的具體實施例，CCL19基因編碼框設置于UL23基因序列的第387-521位核苷酸之間是通過將UL23基因序列的第388-520位核苷酸敲除，之后將CCL19基因編碼框插入UL23基因序列的第387-521位核苷酸之間獲得的。

根據本發明的實施例，所述構建體的ICP47和ICP34.5被敲除。敲除HSV基因組中的復制非必需基因ICP47，可提高被病毒感染的腫瘤細胞表面MHC-I的表達和細胞抗原呈遞的能力；敲除雙拷貝ICP34.5，可使HSV不在正常細胞內復制增殖，只能選擇性地在腫瘤細胞中復制，進而提高HSV病毒地用藥安全性。

根據本發明的實施例，所述啟動子包括選自CMV、CAG、EF1α、勞斯肉瘤氏病毒長末端重復序列(RSV LTR)、金屬硫蛋白I(MTI)的至少之一。

根據本發明的實施例，所述HSV為HSV1。發明人發現，HSV2可能引起生殖器感染，進而選擇HSV1，安全性進一步提高。