[發(fā)明專利]一種用于坡鹿親子鑒定的SSR熒光標記引物和鑒定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010548407.3
• 申請日: 2020-06-16
• 公開（公告）號: CN111662989B
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發(fā)明（設計）人: 李慧明;陳興永;陳金平;蘇力;胡倩雯
• 申請（專利權）人: 廣東省科學院動物研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

本發(fā)明公開了一種用于坡鹿親子鑒定的SSR熒光標記引物和鑒定方法。本發(fā)明提供海南坡鹿親子鑒定的SSR熒光標記引物，可用于海南坡鹿親子鑒定及家系管理，從而合理的指導海南坡鹿人工繁育工作，為保護海南坡鹿的遺傳多樣性，種群遺傳機構等研究提供了強有力的工具。另外本發(fā)明還采用添加M13接頭的方法，僅需合成一個M13熒光標記引物進行PCR擴展，從而節(jié)省了合成大量熒光引物所花費的成本和時間。

技術領域：

本發(fā)明屬于動物親子鑒定領域，具體涉及一種用于坡鹿親子鑒定的SSR熒光標記引物和鑒定方法。

背景技術：

我國是世界上鹿類動物種類數(shù)最多的國家，鹿科動物的種類多樣性是我國重要的生物資源，現(xiàn)共有9屬16種。其中，海南坡鹿(Cervus eldi hainanus)是我國的特有種，僅分布于海南島。自20世紀70年代后，由于嚴重的非法捕殺及棲息地大規(guī)模的破壞，使得海南坡鹿的野生種群急劇下降，最嚴重時期僅剩少量個體(僅26頭左右)，主要分布在海南大田國家自然保護區(qū)等地。目前海南坡鹿已被列入《瀕危野生動植物種國際貿(mào)易公約》(Convention on international trade in endagered species of wild fauna andflora,CITES)，被世界自然保護聯(lián)盟(IUCN)列為瀕危物種，在中國瀕危動物紅皮書中被列入瀕危級保護動物，屬于我國一級重點保護動物。

目前，為了擴大現(xiàn)生種群規(guī)模、增加遺傳多樣性、人工繁育和就地保護已經(jīng)成為保護瀕危物種的重要措施。雖然通過長期的就地保護措施，海南坡鹿的種群數(shù)量有所恢復，但由于種群經(jīng)歷了瓶頸效應和奠基者效應，新建種群與源種群出現(xiàn)遺傳分化，新建立種群的遺傳多樣性低于源種群。而且小種群的坡鹿極易發(fā)生近親繁殖，導致其生長性能及繁殖能力的下降等問題十分突出。因此建立一個穩(wěn)定的人工飼養(yǎng)種群，避免近交繁殖導致的種群衰退，增加有效種群大以采取與親緣關系最小的個體進行長期基因交流為目的的選育及優(yōu)化配對工作顯得尤為重要。目前，針對海南坡鹿的繁殖研究在海南地區(qū)原棲息地開展較多，但有關遷地保護和繁殖的研究報道仍然比較少。

微衛(wèi)星DNA(Microsatellite)又稱為簡單重復序列(Simple Sequences Repeats,SSR),是常用的DNA分子標記，具有多態(tài)性豐富、雜合度高，共顯性遺傳、遺傳穩(wěn)定性良好等優(yōu)點，獲得結(jié)果可靠、方法簡單、省時省力，因此被廣泛應用于構建基因圖譜、檢測遺傳變異、個體間親子關系鑒定、種群遺傳分析等研究領域。

目前，還沒有將微衛(wèi)星分子標記應用到海南坡鹿親子鑒定和遺傳管理的報道。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的是針對上述問題，提供一種應用于海南坡鹿親子鑒定的SSR熒光標記引物和親子鑒定方法，用于解決海南坡鹿在繁殖配對過程中，由于小種群交配、不同親本混養(yǎng)而導致的個體識別困難，譜系不清等難題，為海南坡鹿養(yǎng)殖場建立其家系譜系提供科學依據(jù)，以期合理的指導海南坡鹿人工種群的繁育保育工作。

本發(fā)明的應用于海南坡鹿親子鑒定的SSR熒光標記引物組，是從以下引物對中任選4個以上

CES11：

F：5'-TGGAAGAAACCAAAAGAAGAACA-3'，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，R：5'-GTCGGACACGACTGAAGCTACT-3'，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

CES19：

F：5'-ACTTGAGATTTAGACAAGCCTGG-3'，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，R：5'-TTGATTGTGCCAACTTTAGATGA-3'，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

CES30：