[發明專利]一種秸稈降解產物制備培養基的方法在審
| 申請號： | 202010548023.1 | 申請日： | 2020-06-16 |
| 公開（公告）號： | CN111690588A | 公開（公告）日： | 2020-09-22 |
| 發明（設計）人： | 高星愛;李忠和;張永鋒;王鑫;解嬌 | 申請（專利權）人： | 吉林省農業科學院 |
| 主分類號： | C12N1/22 | 分類號： | C12N1/22 |
| 代理公司： | 長沙智德知識產權代理事務所(普通合伙) 43207 | 代理人： | 段芳萼 |
| 地址： | 130000 吉林省長*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 秸稈 降解 產物 制備 培養基 方法 | ||
1.一種秸稈降解產物制備培養基的方法，其特征在于，包括如下具體步驟：
S1：秸稈發酵液的制備：
S11：以腐熟好的秸稈、樹葉等廢棄物腐爛的腐植土作為菌株來源，一并放入到塑料袋中，封口，置于3℃-5℃溫度條件下的冰箱內保存，備用；
S12：將0.5%的玉米秸稈作為碳源分別加入多個100mL的液體培養基中，并在該培養基中放入濾紙條，并對該培養基滅菌消毒；
S13：在滅菌消毒后的培養基中加入10%的S11中的腐殖土，常溫靜止培養，直至培養基中的濾紙條完全降解，得到培養液；
S14：取5%培養液進行轉接，重復此過程進行連續繼代培養，淘汰掉降解能力較弱的培養物，得到降解能力較強的剩余培養物，重復轉接幾代后，得到1組復合微生物秸稈降解菌劑；
S15：以秸稈作為發酵底物，對上述得到的復合微生物秸稈降解菌劑進行發酵，得到秸稈發酵液；
S2：產絮菌的制備：
S21：從污水池不同位置取2mL污水樣品，分別加入98mL液體培養基中，在溫度為30℃，150r/min搖床振蕩的條件下培養1d，獲取富集培養液；
S22：將上述富集培養液用無菌水稀釋到10-6后，取0.1mL分別涂布于固體培養皿上，培養48 h后，選擇表面呈現光滑且帶有黏性的單菌落，并采用平板劃線法對其進行分離，得到菌株；
S23：將上述得到的菌株接入100mL的標準發酵培養基中培養，得到發酵液，并對該發酵液中的菌株進行初選；
S24：菌株復選：在100mL的標準發酵培養基中接入初篩所獲得的菌株，在25℃-30℃的篩選溫度與150r/min搖床震蕩的條件下對其進行72h的培養，得到菌液，使用菌液對污水處理后的絮凝率作為指標，篩選出效果明顯且效率高的絮凝菌株；
S3：將S15中得到的秸稈發酵液用離心機離心，去除培養液里面殘留的纖維素降解菌體，以得到秸稈發酵液作為產絮菌的培養基。
2.根據權利要求1所述的一種秸稈降解產物制備培養基的方法，其特征在于：步驟S11中的周邊土壤選自公主嶺、吉林、長春中的某一地。
3.根據權利要求1所述的一種秸稈降解產物制備培養基的方法，其特征在于：步驟S23中，對發酵液中的菌株進行初選的具體步驟為：
S231：取髙嶺土4g， CaCl2 0.2g，蒸餾水1L混勻制成4%高嶺土懸浮液；
S232：向量筒內加入98ml高嶺土懸浮液，再加入2mL發酵液，將量筒上下顛倒5-8次，靜置觀察；
S233：篩選出能使高嶺土懸浮液中出現顆粒狀沉淀的菌株作為初選菌株。
4.根據權利要求1所述的一種秸稈降解產物制備培養基的方法，其特征在于：步驟S3中，離心機的離心條件為6000r/min，離心時間10-15min。
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