[發明專利]一種胰島素淀粉樣纖維化的電化學檢測方法

有效

• 申請號: 202010544832.5
• 申請日: 2020-06-15
• 公開（公告）號: CN111751415B
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發明（設計）人: 顏紫喬;胡耿鑫;何敏儀;李紅
• 申請（專利權）人: 華南師范大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26
• 代理公司: 廣東廣信君達律師事務所 44329
• 代理人: 張燕玲

本發明屬于傳感器技術領域，公開了一種胰島素淀粉樣纖維化的電化學檢測方法。本發明用紫外燈等方法誘導胰島素淀粉樣纖維化，以金電極為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，使用多通道數據采集器，進行實時采集開路電位數據。該方法實時追蹤檢測胰島素淀粉樣纖維化的過程：第一階段開路電位變化較為緩慢；第二階段開路電位迅速增大，第三階段開路電位變得較為平穩。其纖維生長曲線呈“s”型，與透射電子顯微鏡的測試結果一致。該方法成本低廉、操作簡便、數據處理簡單、所需樣品用量少，是一種對淀粉樣蛋白纖維無損的實時高靈敏度檢測，在生物傳感的電化學檢測領域有廣闊的應用前景。

技術領域

本發明屬于傳感器技術領域，具體涉及一種胰島素淀粉樣纖維化的電化學檢測方法。

背景技術

蛋白質分子是細胞活動的基礎，正確的空間結構是其發揮正常生理功能的先決條件。在某些條件下，蛋白質可發生錯誤折疊而導致淀粉樣纖維化。淀粉樣纖維沉積是很多人類疾病，如亨廷頓氏病、糖尿病、帕金森病以及阿爾茲海默癥等的共同特征之一，所以探究影響蛋白質的結構穩定性及其淀粉樣纖維化的環境條件具有重要意義。紫外光是日常引起蛋白質結構失穩的一個重要因素。而牛胰島素一級結構簡單、分子量小，和人胰島素具有高度的相似性，且極易形成淀粉樣纖維，通常將其作為研究多肽淀粉樣纖維化、篩選抗纖維化藥物以及纖維細胞毒性分子機制的模型分子。所以，通過紫外光誘導胰島素纖維化，研究蛋白質淀粉樣纖維形成的環境條件和分子機制對于探索相關疾病的病因和治療方法具有重要的理論意義和實際應用價值。

目前，研究胰島素淀粉樣纖維形成有圓二色譜、熒光光譜、拉曼光譜、太赫茲時域光譜、電子顯微鏡、偏振光顯微鏡和相關性分析等常見方法，但這些方法普遍測試費用較高、數據分析較復雜、樣品處理較麻煩。相比之下，電化學儀器成本低、靈敏度高且操作簡便。

發明內容

為了克服現有技術的缺點與不足，本發明的首要目的在于提供一種胰島素淀粉樣纖維化的電化學檢測方法。該方法是利用紫外燈等方法誘導胰島素淀粉樣纖維化，實時采集開路電位數據，實現對淀粉樣蛋白纖維無損的實時高靈敏度檢測，是一種操作快速簡便、低廉環保、高效穩定的電化學方法。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種胰島素淀粉樣纖維化的電化學檢測方法，包括以下步驟：

(1)配制三羥甲基氨基甲烷緩沖溶液，并以此配制胰島素溶液；

(2)誘導胰島素溶液淀粉樣纖維化，將金電極作為工作電極浸入胰島素溶液中，以飽和甘汞電極為參比電極，分別與多通道數據采集器的2個電極接頭連接，進行自動測試，實時采集開路電位數據；

(3)依據步驟(2)得到誘導處理不同時間的實時開路電位數據，繪制開路電位隨誘導處理時間變化曲線。

優選地，步驟(1)所述胰島素溶液的濃度為0.1～500μmol/L，更加優選為4μmol/L。

優選地，步驟(1)所述三羥甲基氨基甲烷緩沖溶液的濃度為0.02mol/L，且pH值為2.0～9.0。

優選地，步驟(2)所述誘導胰島素溶液淀粉樣纖維化是使用紫外光進行誘導；步驟(3)所述誘導處理是指紫外光光照。

優選地，所述紫外光的光源波長為5～500nm。

優選地，步驟(3)所述誘導處理時間為1s～30d。

與現有技術相比，本發明具有以下優點及有益效果：本發明無需繁瑣的樣品處理以及復雜的電極修飾，可避免樣品處理及修飾電極而導致的成本高、耗時長、操作繁瑣。其不僅具有高靈敏度、高兼容性和低檢出限等優點，而且能夠對淀粉樣纖維化過程進行無損實時監測；本發明在識別胰島素纖維化的過程中，能快速讀取電化學信號的數據，有利于實際樣品中高效檢測，具有一定的現實意義，在生物傳感的電化學檢測領域有廣闊的應用前景。

附圖說明