[發明專利]一種基于釩酸鉍的光電化學檢測miRNA-21含量的方法

有效

• 申請號: 202010542514.5
• 申請日: 2020-06-15
• 公開（公告）號: CN111638255B
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 王光麗;劉田利;顧萌萌;孫冬雪
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N27/327;C12Q1/682
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種光電化學測定miRNA-21含量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)BiVO₄/ITO電極的制備：將BiVO₄分散于水中，形成BiVO₄懸濁液；然后在ITO電極表面滴涂BiVO₄懸濁液，干燥，即得BiVO₄/ITO電極；

(2)生物識別及信號放大反應：對不同濃度的miRNA-21體系分別進行擴增反應，然后加入核酸內切酶進行酶切反應，得到含有較多單鏈DNA的裂解液；

(3)電極表面雜交識別反應和光電流測定：通過戊二醛交聯反應將胺官能團化的探針DNA固定到BiVO₄/ITO電極上；然后將步驟(2)所得裂解液、緩沖液體系加入到電極表面，先進行雜交反應，然后加入EXO I繼續反應，最后加入信號分子溶液進行孵育；孵育完成后，以該電極作為工作電極，采用三電極體系，進行光電流測定；

(4)線性模型構建：利用步驟(3)中光電流計算得到不同濃度下的光電流差值，然后利用光電流差與miRNA-21的濃度構建得到線性模型；其中，光電流差值為不同miRNA-21濃度的光電流值與miRNA-21濃度為0的光電流值之間的差值。

2.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(3)中信號分子為亞甲基藍和/或耐爾藍。

3.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(1)中BiVO₄懸濁液的濃度為1mg/mL。

4.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(1)中BiVO₄通過如下方法制備得到：

將鉍鹽溶液與釩酸鹽溶液混合，兩種溶液的物質的量濃度之比為1:1，混勻后，移入高壓反應釜中進行反應；反應完成后，冷卻、洗滌、干燥，得到粉末狀BiVO₄產物。

5.根據權利要求4所述方法，其特征在于，釩酸鹽為偏釩酸銨或釩酸鉀中的一種；鉍鹽為硝酸鉍。

6.根據權利要求4所述方法，其特征在于，反應的溫度100-200℃，反應的時間為8-20h。

7.根據權利要求1-6任一項所述方法，其特征在于，所述步驟(3)中是將裂解液、緩沖體系滴加至電極表面，在37±0.5℃下進行雜交反應；引入EXO I，在37±0.5℃下繼續反應；最后，取10μM信號分子溶液在電極表面37±0.5℃下進行孵育。

8.根據權利要求1-6任一項所述方法，其特征在于，所述步驟(3)中的光電流測定是采用三電極體系，通過電流-時間技術，以所制備的電極作為工作電極，置于pH＝7的Tris-HCl中，在相對于Ag/AgCl參比電極為0V的電壓下進行測定。

9.根據權利要求7所述方法，其特征在于，所述步驟(3)中的光電流測定是采用三電極體系，通過電流-時間技術，以所制備的電極作為工作電極，置于pH＝7的Tris-HCl中，在相對于Ag/AgCl參比電極為0V的電壓下進行測定。

10.根據權利要求1-6任一項所述方法，其特征在于，生物識別及信號放大反應中用到的miRNA-21堿基序列為5'–UAG CUU AUC AGA CUG AUG UUG A–3'；步驟(3)中固定電極上的探針DNA堿基序列為5'–NH₂–C₆ CCA CCT CCG CGC GAA GTC TCA A–3'。