[發(fā)明專利]內(nèi)酰胺酶及其應(yīng)用和酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010542479.7
• 申請(qǐng)日: 2020-06-15
• 公開（公告）號(hào): CN111621492B
• 公開（公告）日: 2021-10-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高仰哲;吳法浩;李鋼;王志航
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽紅杉生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/86
• 分類號(hào): C12N9/86;C12N15/55;C12P41/00;C12P17/10
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 覃蛟

1.一種內(nèi)酰胺酶，其特征在于，所述內(nèi)酰胺酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種核酸分子，其特征在于，其用于編碼如權(quán)利要求1所述的內(nèi)酰胺酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

4.如權(quán)利要求1所述的內(nèi)酰胺酶在酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯中的應(yīng)用。

5.一種酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯的方法，其特征在于，其包括：在緩沖液體系中，將底物和如權(quán)利要求1所述的內(nèi)酰胺酶混合反應(yīng)，所述底物為2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚-5-烯-3-酮。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯的方法，其特征在于，所述反應(yīng)溫度為15~40℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯的方法，其特征在于，所述反應(yīng)溫度為20~35℃。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯的方法，其特征在于，所述反應(yīng)溫度為25~30℃。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯的方法，其特征在于，所述內(nèi)酰胺酶的用量為所述底物質(zhì)量的1%~2%。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯的方法，其特征在于，所述內(nèi)酰胺酶的用量為所述底物質(zhì)量的1%。

11.根據(jù)權(quán)利要求5所述的酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯的方法，其特征在于，所述底物在緩沖溶液體系中的濃度小于700g/L。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯的方法，其特征在于，所述底物在緩沖溶液體系中的濃度為500~600 g/L。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯的方法，其特征在于，所述底物在緩沖溶液體系中的濃度為550~600 g/L。

14.根據(jù)權(quán)利要求5所述的酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯的方法，其特征在于，所述緩沖溶液體系為磷酸鹽緩沖液。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯的方法，其特征在于，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為8~12mM。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯的方法，其特征在于，所述磷酸鹽緩沖液保持pH為6~8。

17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯的方法，其特征在于，所述磷酸鹽緩沖液保持pH為7。

18.根據(jù)權(quán)利要求5~16任一項(xiàng)所述的酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯的方法，其特征在于，在反應(yīng)后，加入有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取。

19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯的方法，其特征在于，所述有機(jī)溶劑為二氯甲烷。

20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的酶法拆分制備(1R，4S)-文斯內(nèi)酯的方法，其特征在于，加入有機(jī)溶劑混合均勻后，先進(jìn)行濃縮，再加入有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取。