[發明專利]一種可同時檢測β淀粉樣蛋白沉積斑塊和過氧亞硝酸根的熒光探針及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010542302.7
• 申請日: 2020-06-15
• 公開（公告）號: CN111777603B
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發明（設計）人: 唐波;解希雷;劉光照;王栩;張建;焦曉云
• 申請（專利權）人: 山東師范大學
• 主分類號: C07D417/04
• 分類號: C07D417/04;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 鄭平

本發明涉及一種可同時檢測β淀粉樣蛋白沉積斑塊和過氧亞硝酸根的熒光探針的制備方法與應用，其結構式為：將該熒光探針命名為BTNPO，該熒光探針以萘?苯并噻唑衍生物為熒光團，以取代的內酰胺官能團作為ONOO^?反應識別基團，除與ONOO^?快速響應外，探針本身還能與Aβ沉積斑塊結合，且靈敏度高、選擇性好。能作為一種優良的成像工具，應用于活細胞以及AD模型小鼠中對Aβ沉積斑塊和ONOO^?的同時檢測。

技術領域

本發明屬于熒光成像檢測技術領域，具體涉及一種可同時檢測β淀粉樣蛋白沉積斑塊和過氧亞硝酸根的熒光探針及其制備方法與應用。

背景技術

公開該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經成為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

目前研究表明，β淀粉樣蛋白(Aβ)聚集形成的沉積斑塊是導致認知功能下降的關鍵因素之一。Aβ沉積斑塊的神經毒性可以改變線粒體的鈣離子穩態，誘發炎癥，增加活性氧(ROS)的產生。已有研究證明，Aβ沉積斑塊可以刺激神經細胞產生過量的過氧亞硝酸根(ONOO^-)加速對神經元損害。ONOO^-作為一種ROS，可以對生物體內的脂質、蛋白質以及DNA造成不可逆的損害。研究人員在阿爾茨海默病(AD)患者的腦部神經元內發現了高水平的硝化蛋白。事實證明，Aβ沉積斑塊和ONOO^-與AD的發生發展密切相關。因此，許多小分子熒光探針被開發并用于對Aβ沉積斑塊或ONOO^-的檢測。然而，發明人發現：能夠同時檢測Aβ沉積斑塊和ONOO^-的小分子熒光探針卻極少。

發明內容

為了克服上述問題，本發明的目的是提供一種可同時檢測Aβ沉積斑塊和ONOO^-的熒光探針及其制備方法與應用。將該熒光探針命名為BTNPO，該探針以萘-苯并噻唑衍生物為熒光團，以取代的內酰胺作為ONOO^-反應基團，可實現與ONOO^-的瞬時響應(約10s)，且該探針能夠與Aβ沉積斑塊結合導致熒光增強。該熒光探針能夠通過雙熒光通道對Aβ沉積斑塊和ONOO^-進行同時檢測，且具有靈敏度高、選擇性好的特點，能在細胞與活體水平上實現對兩者的同時熒光成像。

為實現上述技術目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一個方面，提供了熒光探針在同時檢測β淀粉樣蛋白沉積斑塊和過氧亞硝酸根中的應用，所述熒光探針的結構式為：

本發明的探針具有靈敏度高、選擇性好的特點，能在細胞與活體水平上實現對兩者的同時熒光成像，能夠用于研究Aβ沉積斑塊和ONOO^-之間的相互關系。

本發明的第二個方面，提供了熒光探針在活細胞水平對β淀粉樣蛋白沉積斑塊和過氧亞硝酸根同時成像中的應用，所述熒光探針的結構式為：

本發明的探針能在活細胞水平通過雙通道對Aβ沉積斑塊和ONOO^-進行熒光成像，染色效果良好，染色時間較短(30min)，染色效率較高。

本發明的第三個方面，提供了熒光探針在活體動物中對β淀粉樣蛋白沉積斑塊和過氧亞硝酸根的同時成像中的應用，所述熒光探針的結構式為：

本發明的探針能通過雙通道對AD模型小鼠腦部切片中的Aβ沉積斑塊和ONOO^-進行熒光成像。

本發明的第四個方面，提供了一種在活細胞水平對β淀粉樣蛋白沉積斑塊和過氧亞硝酸根的同時成像檢測的方法，包括：

將活細胞用Aβ聚集體刺激后，再加入含熒光探針的溶液中孵育；