[發明專利]PLOD2的小分子抑制劑米諾地爾在腫瘤治療中的應用

在審

• 申請號: 202010542257.5
• 申請日: 2020-06-15
• 公開（公告）號: CN111557941A
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發明（設計）人: 鄭樹;郭天南;徐凱倫;邵營寬;鄭希;周碧婷;余捷凱
• 申請（專利權）人: 浙江大學;西湖大學
• 主分類號: A61K31/506
• 分類號: A61K31/506;A61P35/00;A61P35/04
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 趙杭麗

本發明提供PLOD2的小分子抑制劑米諾地爾在腫瘤治療中的應用，所述的米諾地爾化學名為6?(1?哌啶基)?2,4?嘧啶二胺,3?氧化物。具體涉及小分子抑制劑米諾地爾的第二適應癥——通過抑制PLOD2對結直腸癌起到治療作用。本發明中首先使用蛋白質組學對比，確定了結直腸癌高表達蛋白PLOD2。發現部分敲除編碼PLOD2的堿基后，結直腸癌細胞增殖、遷移和侵襲能力下降，提出PLOD2作為結直腸癌治療靶點的可能。本發明使用PLOD2蛋白的抑制劑米諾地爾，用于抑制結直腸癌細胞系中PLOD2，實現腫瘤細胞惡性能力下降，并且在小鼠模型上驗證米諾地爾可以抑制PLOD2高表達的腸癌異種移植腫瘤的生長。

技術領域

本發明屬于醫藥領域，涉及PLOD2的小分子抑制劑米諾地爾在腫瘤治療中的應用，是PLOD2的小分子抑制劑米諾地爾在制備腫瘤治療藥物中的應用。所述小分子抑制劑米諾地爾的第二適應癥發現——通過發現抑制PLOD2對結直腸癌起到潛在治療作用。

背景技術

結直腸癌是臨床最常見的消化道惡性腫瘤，發病率和病死率均居全球前三位。目前外科手術仍然是結直腸癌治療最重要、最有效的手段，放療和化療作為傳統治療方法仍然是結直腸癌的重要組成部分。與此同時，靶向治療和免疫治療等新治療手段得到了越來越多的研究與應用。對于失去手術機會的晚期結直腸癌，而由于腫瘤異質性和耐藥性等原因，很多患者缺乏合適的藥物或多線耐藥，并沒有很好的療效。開發小分子抑制劑治療，仍然是結直腸癌治療的重要一步。

PLOD2(procollagen-lysine,2-oxoglutarate 5-dioxygenase 2，前膠原賴氨酸，2-氧戊二酸5-雙加氧酶2)是PLOD家族一員。PLOD家族在膠原蛋白的交聯和沉積中起著重要的作用，與纖維化和癌癥有關。PLOD2是一種功能性的酶,位于細胞質的粗面內質網，參與膠原蛋白的翻譯后修飾，主要功能是催化膠原蛋白端肽區賴氨酸殘基羥基化。發生賴氨酸羥基化的膠原蛋白在分泌出細胞外后可相互交聯形成穩定結構的羥賴氨酸吡啶鏈，相反，未發生羥基化的膠原蛋白所形成的纖維交聯不穩定，容易降解。當細胞內PLOD2表達明顯升高時,由于羥賴氨酸吡啶鏈生成增加,將導致膠原纖維過度沉積。許多研究已經報道了以PLOD2為代表的細胞外基質相關蛋白促進了腫瘤轉移中膠原的形成，并提供了腫瘤轉移的“高速公路”效應。有研究顯示，在正常小鼠結腸中，未檢測到PLOD2及其家族表達，而在原發性結直腸癌中，PLOD2升高。

米諾地爾，化學名為6-(1-哌啶基)-2,4-嘧啶二胺,3-氧化物，為白色或類白色結晶性粉末。起初作為降血壓藥物，用于頑固性、原發性或腎性高血壓，在臨床上應用并不廣泛。目前在臨床上，以溶劑制劑形式，主要運用于預防和治療雄激素源性脫發。米諾地爾進入毛囊后，會和一部分硫酸根離子結合成硫酸鹽，發揮生發作用。研究表明，米諾地爾可通過抑制PLOD2，在動物水平被證明對實體瘤的發展和轉移有一定抑制作用，如宮頸癌和肉瘤。

目前尚無PLOD2抑制在結直腸癌中作為治療靶點，或米諾地爾可運用于結直腸癌治療的報道。

發明內容

本發明的目的是提供PLOD2的小分子抑制劑米諾地爾在制備腫瘤治療藥物中的應用。所述的米諾地爾化學名為6-(1-哌啶基)-2,4-嘧啶二胺,3-氧化物，其化學結構式為：

所述腫瘤為結直腸癌。

本發明通過抑制PLOD2蛋白的表達來抑制腫瘤的增殖、遷移和侵襲。1mM濃度達到體外腫瘤的抑制效果，3mg/kg濃度到達體內腫瘤的抑制效果。

本發明使用免疫印跡法和組織芯片，提供了結直腸癌與正常組織中PLOD2表達情況，本發明提供結直腸癌與正常結直腸組織的蛋白譜圖，并找到其差異蛋白組，顯示PLOD2是其中差異最顯著的，在結直腸癌組織中顯著高表達。

本發明構建了兩株PLOD2敲除的結直腸癌細胞系，檢測了其增殖、遷移和侵襲能力的變化，證明PLOD2的抑制有治療結直腸癌的潛在價值。