[發(fā)明專利]一種特異抑制OLFM4基因表達的siRNA及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010541444.1
• 申請日: 2020-06-15
• 公開（公告）號: CN111560376B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐承富;王馨雨;陳盛暉
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/713;A61P1/16;C12N5/10;C12Q1/02
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 邱啟旺

本發(fā)明公開了一種特異抑制OLFM4基因表達的siRNA及其應(yīng)用，特異抑制OLFM4基因表達的siRNA為由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示核苷酸序列組成的雙鏈RNA；體外試驗結(jié)果表明，本發(fā)明提供的RNA可以特異高效地抑制OLFM4基因表達，促進脂滴和甘油三酯的沉積，可構(gòu)建NAFLD體外模型。本發(fā)明可以應(yīng)用于非酒精性脂肪性肝病的發(fā)病機制和潛在治療方法的研究。本發(fā)明具有重要價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種特異抑制OLFM4基因表達的siRNA及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

小干擾RNA(Small interfering RNA；siRNA)又稱短干擾RNA(short interferingRNA)或沉默RNA(silencing RNA)，是一種長20-25個核苷酸的雙股RNA。RNA干擾(RNAinterference，RNAi)現(xiàn)象是一種進化上保守的用于抵御轉(zhuǎn)基因或外來病毒侵犯的防御機制。與靶基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA存在同源互補序列的內(nèi)源性或外源性雙鏈RNA(double-stranded RNA，dsRNA)在細胞內(nèi)特異降解該mRNA，從而實現(xiàn)特異性基因封閉，是一種序列特異性的轉(zhuǎn)錄后基因沉默。RNAi技術(shù)已廣泛應(yīng)用于多種生物基因功能的研究。針對目的基因構(gòu)建siRNA，利用RNAi技術(shù)封閉該基因的表達，根據(jù)現(xiàn)象的改變可以分析基因功能。相比于基因敲除技術(shù)的長實驗周期及永久性基因關(guān)閉，RNAi技術(shù)則可在短期內(nèi)可控性地關(guān)閉10個基因，因此RNAi技術(shù)可以較靈活、快速得用于生物實驗研究。siRNA經(jīng)過化學(xué)修飾可以使其免受酶解，具有更良好的靶基因沉默效率、細胞穿透能力、熱力學(xué)穩(wěn)定性以及藥物代謝學(xué)特征。RNAi技術(shù)已經(jīng)廣泛運用于疾病發(fā)病機制的研究。

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指除外酒精和其他明確肝損因素所致的以肝細胞脂肪變性和脂質(zhì)貯積為特征的臨床病理綜合征。近年來，隨著人們生活習(xí)慣和飲食結(jié)構(gòu)的改變，我國成人NAFLD患病率快速增長，已高達29.2％，西方一些發(fā)達國家更是高于30％，已成為臨床最常見的慢性肝病。根據(jù)病理學(xué)改變及臨床表現(xiàn)，可將NAFLD的自然病程分為單純性NAFLD和非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)。單純性脂肪肝是一種良性疾病，而NASH卻可以逐漸向肝硬化、肝癌等終末期肝病進展。脂變肝臟對很多藥物和毒物的敏感性增加，增加了臨床用藥風(fēng)險；再者，NAFLD可通過加劇機體代謝紊亂與2型糖尿病、冠心病、慢性腎臟疾病、肝外惡性腫瘤等疾病的高發(fā)密切相關(guān)，可能導(dǎo)致嚴(yán)重的臨床后果。NAFLD發(fā)生發(fā)展的分子機制至今尚未明確，其治療也缺乏特別有效方法。因此，加強NAFLD的相關(guān)研究，尤其是NAFLD發(fā)病機制的研究對推動NAFLD的防治工作有著重要的意義。

嗅質(zhì)蛋白4(olfactomedin4，OLFM4，又稱GW112或hGC-1)是一種具有多種生物學(xué)功能的糖蛋白，屬于嗅質(zhì)蛋白家族，該家族在C端特異性存在一個含有約250個氨基酸的嗅質(zhì)蛋白結(jié)構(gòu)域。OLFM4最初是在人造血髓細胞中用粒細胞集落刺激因子處理克隆得到，位于13q14.3號染色體上，編碼了一個510個氨基酸的糖蛋白，其分子量為72kDa。OLMF4可在細胞膜、細胞質(zhì)、細胞核、線粒體和成熟的中性粒細胞顆粒中表達。OLFM4的表達具有組織器官特異性，在消化道中表達相對較高，在胃、骨髓中有中度表達，在其他組織中表達較弱或不表達。OLFM4在炎癥性腸病腸黏膜上皮細胞及胃癌等消化系統(tǒng)腫瘤組織中表達進一步升高，參與自身免疫調(diào)節(jié)以及腫瘤細胞周期與凋亡調(diào)控。目前尚未有研究報道OLFM4與非酒精性脂肪肝關(guān)系，本技術(shù)方案首次提出OLFM4可能與NAFLD相關(guān)，并通過預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)OLFM4的表達水平在NAFLD的細胞模型中顯著上調(diào)，提示了OLFM4在NAFLD中的潛在調(diào)節(jié)作用。采用RNAi技術(shù)進行OLFM4在NAFLD發(fā)病中機制的研究是對NAFLD發(fā)病機制的重要補充，對揭示OLFM4在NAFLD中的潛在發(fā)病機制有重要意義，有助于啟發(fā)后續(xù)研究從全新的角度解決NAFLD的治療難題，具有重要的臨床、科研意義和巨大的社會經(jīng)濟效益。

發(fā)明內(nèi)容