[發(fā)明專利]一種分散性土的綠色微生物改性劑的制備方法和應(yīng)用方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010540325.4 | 申請日： | 2020-06-15 |
| 公開（公告）號： | CN111548040A | 公開（公告）日： | 2020-08-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李馳;武慧敏;史冠宇;鄧有偉;高瑜;王翠艷;王家相 | 申請（專利權(quán)）人： | 內(nèi)蒙古工業(yè)大學(xué);內(nèi)蒙古自治區(qū)水利水電勘測設(shè)計院 |
| 主分類號： | C04B20/02 | 分類號： | C04B20/02;C04B14/10;C04B24/14 |
| 代理公司： | 上海申蒙商標(biāo)專利代理有限公司 31214 | 代理人： | 黃明凱 |
| 地址： | 010051 內(nèi)蒙古自治區(qū)呼*** | 國省代碼： | 內(nèi)蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 分散性 綠色 微生物 改性 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種分散性土的綠色微生物改性劑的制備方法，其特征在于所述微生物改性劑的制備方法包括以下步驟：所述微生物改性劑由試劑A和試劑B所組成，所述試劑A為經(jīng)微生物菌液所提取的胞內(nèi)外脲酶溶液，所述試劑B為能夠促使脲酶發(fā)揮水解作用的尿素溶液和鈣源溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分散性土的綠色微生物改性劑的制備方法，其特征在于所述微生物菌液由巴氏芽孢桿菌進(jìn)行活化培養(yǎng)之后再進(jìn)行大量富集培養(yǎng)而得到，所述的巴氏芽孢桿菌為商品菌種，購自于美國菌種保藏中心，保藏編號：ATCC 11859。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種分散性土的綠色微生物改性劑的制備方法，其特征在于所述活化培養(yǎng)以及所述大量富集培養(yǎng)的要求為：液態(tài)培養(yǎng)基為NH4-YE ，購自于美國菌種保藏中心，保藏編號：ATCC 1376；接種量5～6％，培養(yǎng)溫度25～30 ℃，培養(yǎng)轉(zhuǎn)速150～200rpm，培養(yǎng)時長36～48 h。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種分散性土的綠色微生物改性劑的制備方法，其特征在于所述胞內(nèi)外脲酶溶液的提取步驟為：
（1）由高速溫控離心機(jī)對所述微生物菌液進(jìn)行離心沉降處理得到細(xì)菌液上清液和細(xì)菌菌落沉淀，所述細(xì)菌液上清液包含巴氏芽孢桿菌胞外脲酶，所述離心沉降處理的條件為:離心溫度4 ℃、離心轉(zhuǎn)速10000 rpm、離心時長20 min；
（2）每20ml所述微生物菌液經(jīng)離心沉降處理得到的所述細(xì)菌菌落沉淀中，將所述細(xì)菌液上清液與溶菌酶溶解液按照5:3的體積比混合均勻并破胞，以獲取巴氏芽孢桿菌胞內(nèi)脲酶，所述破胞的條件為：破胞溫度25℃、破胞時長1h；所述破胞完成后的所述破胞液再次由所述高速溫控離心機(jī)在離心溫度4 ℃、離心轉(zhuǎn)速10000 rpm、離心時長20min下進(jìn)行所述離心沉降處理獲得破胞液，所述破胞液即為所述巴氏芽孢桿菌的所述胞內(nèi)外脲酶溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要4所述的一種分散性土的綠色微生物改性劑的制備方法，其特征在于所述溶菌酶溶解液的配制方法包括以下步驟：
（1）準(zhǔn)備溶菌酶凍干粉，所述溶菌酶凍干粉保存于-20℃環(huán)境下，使用時提前置于室溫25℃下待用；
（2）準(zhǔn)備無菌蒸餾水，在容器內(nèi)將所述溶菌酶凍干粉與所述無菌蒸餾水按照1g ：10ml的比例進(jìn)行攪拌混合，制備為每ml液體包含100mg溶菌酶的所述溶菌酶溶解液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分散性土的綠色微生物改性劑的制備方法，其特征在于所述試劑A在使用過程中應(yīng)符合最低限度要求的單位酶活性值，所述最低限度要求的單位酶活性值采用電導(dǎo)率儀進(jìn)行測定，測定方法為：將所述試劑A、2mol/L的尿素溶液、無菌蒸餾水按照體積比為1:5:4的比例進(jìn)行混合攪拌，在25℃恒溫水浴鍋內(nèi)進(jìn)行反應(yīng)，控制攪拌速度為250r/min；采用所述電導(dǎo)率儀測量并記錄反應(yīng)前5min內(nèi)每分鐘的電導(dǎo)率值變化，獲得最終平均每分鐘的電導(dǎo)率變化值K，單位為ms/min；根據(jù)公式U=10*K*A計算得出單位酶活性值U，單位為mmol·urea/min，其中，K為平均每分鐘的電導(dǎo)率變化值，單位為ms/min； A為特定系數(shù)，取11.11；獲得所述試劑A在使用過程中所述最低限度要求的單位酶活性值U為200mmol·urea/min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分散性土的綠色微生物改性劑的制備方法，其特征在于所述試劑B的成分包括尿素溶液和鈣源溶液，所述鈣源溶液為二水氯化鈣溶液，所述尿素溶液與所述二水氯化鈣溶液中的鈣離子的摩爾比為1:1，所述尿素溶液的濃度為0.67 mol/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種分散性土的綠色微生物改性劑的制備方法，其特征在于所述試劑B中的尿素濃度為40g/L、二水氯化鈣濃度為98.5 g/L ，所述試劑B的初始PH值為6。
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