[發(fā)明專利]一種凝結芽孢桿菌高產抑菌多肽物質的發(fā)酵工藝及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010540124.4
• 申請日: 2020-06-12
• 公開（公告）號: CN111635918B
• 公開（公告）日: 2023-01-31
• 發(fā)明（設計）人: 方曙光;嚴濤;陳珂可;朱建國;馮勝鵬;程文
• 申請（專利權）人: 微康益生菌（蘇州）股份有限公司
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C12N1/20;C12N1/32;A23L29/00;A23L33/18;A23L3/3526;C12R1/07
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 趙穎

本發(fā)明公開了一種凝結芽孢桿菌高產抑菌多肽物質的發(fā)酵工藝及其應用，涉及芽孢桿菌發(fā)酵技術領域，發(fā)酵工藝包括如下步驟：將凝結芽孢桿菌種子液接種至基礎培養(yǎng)基中，40?45℃，150?250rpm條件下，培養(yǎng)20?30h；其間，在所述凝結芽孢桿菌菌株發(fā)酵生長的對數期中期添加氨基酸類物質；在凝結芽孢桿菌菌株發(fā)酵生長的穩(wěn)定期添加醇類物質。本發(fā)明通過對基礎培養(yǎng)基進行優(yōu)化，優(yōu)化碳、氮比，確保菌株在最適的培養(yǎng)基環(huán)境中生長，多代謝多肽類物質。抑菌多肽含量由原來的1710μg/mL提高至3940μg/mL，抑菌活性物質主要為蛋白類的細菌素，安全無毒，可以應用于食品防腐劑，保鮮劑或醫(yī)藥保健領域。

技術領域

本發(fā)明涉及芽孢桿菌發(fā)酵技術領域，特別涉及一種凝結芽孢桿菌高產抑菌多肽物質的發(fā)酵工藝及其應用。

背景技術

乳酸菌的代謝產物有乳酸、有機酸、不飽和脂肪酸和細菌素等，可抑制某些病原微生物的生長，對宿主有益生作用。但乳酸菌抗逆性較差，對酸、膽鹽敏感；抗生素對某些致病菌具有很好的抑菌效果，能減少于某些疾病的發(fā)生，但是由于抗生素的濫用，造成某些微生物產生耐藥性，形成“超級細菌”，更難防治。

凝結芽孢桿菌又稱為芽孢乳酸菌，為革蘭氏陽性菌，兼性厭氧，能產生芽孢，抗逆性強，其芽孢在100℃高溫下10min存活率能達到96.4％；在pH2.0的酸性條件下，6h存活率達到48.2％；在0.9％膽鹽條件下24h存活率達78.3％。又能產生乳酸、細菌素等抑菌物質，2016年被國家收錄于可用于食品菌株名單目錄當中，其安全性有保障，不產生耐藥性。但是凝結芽孢桿菌產生的抑菌物質受培養(yǎng)基成份、生長條件的影響，其含量較低，缺乏高抑菌的凝結芽孢桿菌相關成熟產品。提高凝結芽孢桿菌的抑菌活性物質的產量，制備成相應產品，促進其廣泛應用有極大的必要性。授權公告號為：CN106191178B，名稱為：一種凝結芽孢桿菌產抑菌活性物質的方法的發(fā)明專利公開了提高凝結芽孢桿菌多肽類抑菌物質的培養(yǎng)基成份，但沒有具體提到菌體在發(fā)酵過程中的優(yōu)化控制。

發(fā)明內容

本發(fā)明提供一種凝結芽孢桿菌高產抑菌多肽物質的發(fā)酵工藝及其應用，解決現有的凝結芽孢桿菌抑菌代謝產量普遍偏低的問題。

為了解決上述技術問題，本發(fā)明的技術方案為：

一種凝結芽孢桿菌高產抑菌多肽物質的發(fā)酵工藝，包括如下步驟：

將凝結芽孢桿菌種子液接種至基礎培養(yǎng)基中，40-45℃，150-250rpm條件下，培養(yǎng)20-30h；其間，在所述凝結芽孢桿菌菌株發(fā)酵生長的對數期中期添加氨基酸類物質；在凝結芽孢桿菌菌株發(fā)酵生長的穩(wěn)定期添加醇類物質。

優(yōu)選的，所述基礎培養(yǎng)基包括糖蜜10-40g/L、酵母浸粉10-30g/L、玉米漿干粉5-30g/L、牛肉浸粉10-30g/L、氯化鈉1-10g/L、乙酸鈉2-10g/L、硫酸鎂0.1-1g/L、硫酸錳2-15mg/L和吐溫80 0.5-2g/L。

優(yōu)選的，所述基礎培養(yǎng)基包括糖蜜40.00g/L、酵母浸粉20g/L、玉米漿干粉10g/L、牛肉浸粉20g/L、氯化鈉5g/L、乙酸鈉5g/L、硫酸鎂0.58g/L、硫酸錳10mg/L和吐溫80 2g/L。

優(yōu)選的，所述基礎培養(yǎng)基pH為7.0。

優(yōu)選的，步驟(1)中接種量是以2-7mL種子液/100mL基礎培養(yǎng)基進行接種。

優(yōu)選的，所述凝結芽孢桿菌種子液是以將凝結芽孢桿菌單菌落接種到PCA液體培養(yǎng)基，40-45℃，150-200rpm，培養(yǎng)20-30h獲得。

優(yōu)選的，所述凝結芽孢桿菌為凝結芽孢桿菌BC99，所述凝結芽孢桿菌BC99命名為凝結芽孢桿菌Bacillus coagulans，保藏編號為：CGMCC No.19487。

優(yōu)選的，所述氨基酸類物質為絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸或脯氨酸中的一種或多種。