[發明專利]一種番茄抗病毒突變體的篩選方法

在審

• 申請號: 202010539688.6
• 申請日: 2020-06-15
• 公開（公告）號: CN111642395A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發明（設計）人: 陶則滿;李建科;劉艷軍;許丁帆;范麗娜;鮮睿;于祎晗;徐玖
• 申請（專利權）人: 天津農學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H1/04
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 韓曉梅

本發明涉及一種番茄抗病毒突變體的篩選方法，步驟如下：⑴番茄帶病毒無菌苗的獲取；⑵番茄愈傷組織的誘導；⑶將番茄愈傷組織分割成小塊，轉接到再生培養基中，再添加一定的滲透壓逆境，培養條件為24h光照，光照強度2000Lx，培養溫度23±1℃，并通過再生芽生長狀況，初步篩選抗病毒再生芽，再經病毒檢測，即得番茄抗病毒突變體。本發明方法通過組織培養技術，在離體條件下，通過逆境篩選，使得組織中某些抗病毒細胞的競爭優勢，篩選出番茄抗病毒突變細胞系，再經過離體再生技術獲得抗病毒植物，從而為番茄抗病毒育種提供良好的抗性種質資源。同時，也可為其他植物抗病毒育種提供一定的參考。

技術領域

本發明屬于植物生物技術領域，尤其是一種番茄抗病毒突變體的篩選方法。

背景技術

植物病毒是造成多種農作物減產和品質下降的重要病原之一,嚴重時甚至造成絕產，給農林業生產帶來巨大損失，被稱為植物的“癌癥”。由于病毒種類繁多，傳播途徑廣泛，又是胞內寄生，植物病毒病的防治非常困難。一般化學藥物很難破壞病毒結構，目前尚未發現某一種農藥能夠一次根治植物病毒病。

目前，常規的抗病毒育種工作量大、育種周期長、缺乏抗病毒種質資源，不易獲得穩定遺傳的抗性基因，且存在遠緣雜交不親和等問題。

在番茄的基因庫中很難找到相應的抗病毒種質資源，因此，不能通過雜交育種方法進行抗病毒品種培育，雖然目前一些研究通過轉基因的手段可以解決某些植物病的問題，但由于試驗方法的局限，不能獲得具備普遍性的抗病毒效果。同時轉基因植物品種在釋放應用上還存在一定的問題，因此這一技術也沒有廣泛應用。

植物組織脫毒培養雖可獲得番茄脫毒苗，是目前脫除植物體內病毒的一種有效手段，但脫毒不等于抗病毒。番茄脫毒苗不具有抗病毒能力，且植物組織脫毒培養費工費時，每次繁殖時都要重新進行脫毒培養，且在露地栽培過程中，會發生再次病毒感染現象，因此其在應用上也存在較大的局限性。

通過檢索，尚未發現與本發明專利申請相關的專利公開文獻。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足之處，提供一種番茄抗病毒突變體的篩選方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種番茄抗病毒突變體的篩選方法，步驟如下：

⑴番茄帶病毒無菌苗的獲取

選取帶卷葉病毒番茄盆栽苗，剪取健壯的莖段，剪去葉片及葉柄，在超凈環境中剪成帶一個腋芽的莖段，70％乙醇浸泡30s，然后用含2.0％有效氯的次氯酸鈉溶液消毒5min，無菌水沖洗5次，每次5min，沖洗后用無菌濾紙吸干外植體表面，并將莖段兩端各剪去3mm，接種到MS培養基上進行腋芽萌發培養，培養條件為連續光照，光照強度2000Lx，培養溫度25±1℃；

經過20d初代培養，將萌發的腋芽從基部剪切，接種到MS培養基上進行繼代增殖培養，獲得番茄組培苗，備用；

⑵番茄愈傷組織的誘導

取步驟⑴獲得的番茄組培苗，剪取葉柄，接種到含愈傷組織誘導培養基上，進行愈傷組織誘導；

愈傷組織誘導培養基的配方為：MS+1.0～2.0mg·L^-16-芐氨基腺嘌呤/6-糠氨基嘌呤/玉米素+1.5～2.0mg·L^-12,4-D+30.0g·L^-1蔗糖，培養基pH為5.8，7g·L^-1瓊脂粉固化；

培養條件為：24h光照，光照強度為1000Lx，培養溫度為25±1℃；

⑶抗病毒再生芽的逆境篩選