[發(fā)明專利]一種番茄抗病毒突變體的篩選方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010539688.6
• 申請(qǐng)日: 2020-06-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111642395A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陶則滿;李建科;劉艷軍;許丁帆;范麗娜;鮮睿;于祎晗;徐玖
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津農(nóng)學(xué)院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00;A01H1/04
• 代理公司: 天津盛理知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209
• 代理人: 韓曉梅

本發(fā)明涉及一種番茄抗病毒突變體的篩選方法，步驟如下：⑴番茄帶病毒無(wú)菌苗的獲取；⑵番茄愈傷組織的誘導(dǎo)；⑶將番茄愈傷組織分割成小塊，轉(zhuǎn)接到再生培養(yǎng)基中，再添加一定的滲透壓逆境，培養(yǎng)條件為24h光照，光照強(qiáng)度2000Lx，培養(yǎng)溫度23±1℃，并通過(guò)再生芽生長(zhǎng)狀況，初步篩選抗病毒再生芽，再經(jīng)病毒檢測(cè)，即得番茄抗病毒突變體。本發(fā)明方法通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)，在離體條件下，通過(guò)逆境篩選，使得組織中某些抗病毒細(xì)胞的競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)，篩選出番茄抗病毒突變細(xì)胞系，再經(jīng)過(guò)離體再生技術(shù)獲得抗病毒植物，從而為番茄抗病毒育種提供良好的抗性種質(zhì)資源。同時(shí)，也可為其他植物抗病毒育種提供一定的參考。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種番茄抗病毒突變體的篩選方法。

背景技術(shù)

植物病毒是造成多種農(nóng)作物減產(chǎn)和品質(zhì)下降的重要病原之一,嚴(yán)重時(shí)甚至造成絕產(chǎn)，給農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)巨大損失，被稱為植物的“癌癥”。由于病毒種類繁多，傳播途徑廣泛，又是胞內(nèi)寄生，植物病毒病的防治非常困難。一般化學(xué)藥物很難破壞病毒結(jié)構(gòu)，目前尚未發(fā)現(xiàn)某一種農(nóng)藥能夠一次根治植物病毒病。

目前，常規(guī)的抗病毒育種工作量大、育種周期長(zhǎng)、缺乏抗病毒種質(zhì)資源，不易獲得穩(wěn)定遺傳的抗性基因，且存在遠(yuǎn)緣雜交不親和等問(wèn)題。

在番茄的基因庫(kù)中很難找到相應(yīng)的抗病毒種質(zhì)資源，因此，不能通過(guò)雜交育種方法進(jìn)行抗病毒品種培育，雖然目前一些研究通過(guò)轉(zhuǎn)基因的手段可以解決某些植物病的問(wèn)題，但由于試驗(yàn)方法的局限，不能獲得具備普遍性的抗病毒效果。同時(shí)轉(zhuǎn)基因植物品種在釋放應(yīng)用上還存在一定的問(wèn)題，因此這一技術(shù)也沒(méi)有廣泛應(yīng)用。

植物組織脫毒培養(yǎng)雖可獲得番茄脫毒苗，是目前脫除植物體內(nèi)病毒的一種有效手段，但脫毒不等于抗病毒。番茄脫毒苗不具有抗病毒能力，且植物組織脫毒培養(yǎng)費(fèi)工費(fèi)時(shí)，每次繁殖時(shí)都要重新進(jìn)行脫毒培養(yǎng)，且在露地栽培過(guò)程中，會(huì)發(fā)生再次病毒感染現(xiàn)象，因此其在應(yīng)用上也存在較大的局限性。

通過(guò)檢索，尚未發(fā)現(xiàn)與本發(fā)明專利申請(qǐng)相關(guān)的專利公開(kāi)文獻(xiàn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種番茄抗病毒突變體的篩選方法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是：

一種番茄抗病毒突變體的篩選方法，步驟如下：

⑴番茄帶病毒無(wú)菌苗的獲取

選取帶卷葉病毒番茄盆栽苗，剪取健壯的莖段，剪去葉片及葉柄，在超凈環(huán)境中剪成帶一個(gè)腋芽的莖段，70％乙醇浸泡30s，然后用含2.0％有效氯的次氯酸鈉溶液消毒5min，無(wú)菌水沖洗5次，每次5min，沖洗后用無(wú)菌濾紙吸干外植體表面，并將莖段兩端各剪去3mm，接種到MS培養(yǎng)基上進(jìn)行腋芽萌發(fā)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為連續(xù)光照，光照強(qiáng)度2000Lx，培養(yǎng)溫度25±1℃；

經(jīng)過(guò)20d初代培養(yǎng)，將萌發(fā)的腋芽從基部剪切，接種到MS培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，獲得番茄組培苗，備用；

⑵番茄愈傷組織的誘導(dǎo)

取步驟⑴獲得的番茄組培苗，剪取葉柄，接種到含愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)；

愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：MS+1.0～2.0mg·L^-16-芐氨基腺嘌呤/6-糠氨基嘌呤/玉米素+1.5～2.0mg·L^-12,4-D+30.0g·L^-1蔗糖，培養(yǎng)基pH為5.8，7g·L^-1瓊脂粉固化；

培養(yǎng)條件為：24h光照，光照強(qiáng)度為1000Lx，培養(yǎng)溫度為25±1℃；

⑶抗病毒再生芽的逆境篩選