[發明專利]檢測新型冠狀病毒的多肽或其組合

有效

• 申請號: 202010539664.0
• 申請日: 2020-06-15
• 公開（公告）號: CN111423496B
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 向志光;劉曉立;秦川;劉云波;鮑琳琳;高虹;佟巍;孔琪;郭智
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院醫學實驗動物研究所;盛世東唐江蘇生物科技有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;G01N33/569
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎

本發明涉及生物醫藥領域，特別涉及檢測新型冠狀病毒的多肽或其組合。經序列抗原預測分析合成12條多肽，12條多肽的混合物PM與新型冠狀病毒重組蛋白RN和RS進行抗原性比較分析，PM與RN、RS的抗原性相當。無病原接觸者亦存在陽性反應；將12條肽分別與無病原接觸者樣品進行測試，其中多肽P5和P8具有良好的抗原特異性；利用P5與P8的混合物P58進行多樣本測試，在ELISA反應體系中其敏感性與重組抗原無明顯差異，特異性達96%。本發明提供的新型冠狀病毒的特異性多肽抗原具有較好的血清學診斷應用價值。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，特別涉及檢測新型冠狀病毒的多肽或其組合。

背景技術

新型冠狀病毒感染的診斷需要經過病原學、影像學、臨床癥狀等手段，而病毒感染引起人類的免疫應答，對患者血液的抗體檢測可以作為輔助診斷的手段。冠狀病毒是一類人類常見的病原體，如HKU1和OS43等β類冠狀病毒亦可引起呼吸道感染，在人群中的感染率較高，新型冠狀病毒同屬β類冠狀病毒，在蛋白序列上他們有一定的相似性。小鼠的MHV病毒也是該屬的病毒，我們將上述4種病毒以及SARS-CoV的NP蛋白進行序列比較（圖1），可見其蛋白序列具有相似性，但仍有一些差別。利用全病毒或是重組蛋白抗原進行檢測時，存在交叉識別其他病毒抗體的可能。

而找到新型冠狀病毒特異的多肽類抗原，能夠避免與其他普通冠狀病毒抗原的交叉，降低其他病毒感染對于此病毒感染抗體識別的干擾具有重要的現實意義。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了檢測新型冠狀病毒的多肽或其組合。該新型冠狀病毒特異性多肽，用于病患病毒抗體診斷。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了多肽或其組合，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1或2所示。

在本發明的一些具體實施方案中，所述多肽的組合中，具有如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列的多肽與具有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的多肽的摩爾比為1：10~10：1；優選1:1。

更重要的是，本發明還提供了所述的多肽或其組合在制備新型冠狀病毒的檢測試劑或檢測工具中的應用。

本發明還提供了檢測新型冠狀病毒的試劑，包括所述的多肽或其組合以及檢測可接受的助劑。

本發明還提供了檢測新型冠狀病毒的試劑盒，包括所述的多肽或其組合以及檢測可接受的助劑或載體。

本發明對新型冠狀病毒的蛋白序列進行分析，尋找與其他冠狀病毒有差異且抗原性強的位點，合成多肽類抗原物質，利用酶聯免疫吸附試驗測定抗原物質與患者、無病原接觸者以及感染實驗動物的血清樣品，評價多肽類抗原的抗原性和特異性。

經病毒抗原蛋白氨基酸序列預測分析篩選并合成12條多肽，12條多肽的混合物（Peptides mixture，PM）與新型冠狀病毒重組蛋白NP（Recombinant NP，RN）和新型冠狀病毒重組蛋白S（Recombinant S，RS）進行抗原性比較分析，PM與RN、RS的抗原性相當。無病原接觸者與PM、RN、RS亦存在免疫反應性；將12條肽分別與數例無病原接觸者血清樣品進行測試，篩選出2條多肽P5和P8，與新型冠狀病毒無接觸者血清樣品無免疫反應性，多肽P5和P8具有良好的抗原特異性；利用P5與P8的混合物P58進行多樣本測試，在ELISA反應體系中其敏感性與重組抗原RN和RS無明顯差異，且以P58為抗原的ELISA檢測方法在健康人群小樣本量的特異性達96%。本發明提供的新型冠狀病毒的特異性多肽抗原P5和P8及其混合物P58具有較好的血清學診斷應用價值。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。