[發(fā)明專利]一種檢測3型鴨甲肝病毒的引物組、試劑盒與應用

有效

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• 申請日: 2020-06-12
• 公開（公告）號: CN111621600B
• 公開（公告）日: 2023-01-10
• 發(fā)明（設計）人: 韋天超;蘭奉瑜;韋平;唐華麗;秦桂清;磨美蘭;黃騰
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

本發(fā)明公開了一種檢測3型鴨甲肝病毒的引物組、試劑盒與應用，屬于病毒檢測技術領域，具體包括3型鴨甲肝病毒兩條特異性內引物、兩條特異性外引物，基于上述檢測引物的試劑盒和非診斷目的應用。本發(fā)明具有特異性好、敏感性高、快速、成本低、操作方法更簡便和特別適合于基層實驗室檢測3型鴨甲肝病毒等優(yōu)點，解決了現(xiàn)有技術檢測時間較長、操作復雜或需要較昂貴的儀器等缺陷。

技術領域

本發(fā)明涉及病毒檢測技術領域，更具體的說是涉及一種檢測3型鴨甲肝病毒的引物組、試劑盒與應用。

背景技術

3型鴨甲肝病毒(Duckhepatitis A virus type 3，DHAV-3)是一種引起4周齡內雛鴨的急性、高度接觸性、致死性傳染病病原。對雛鴨的致死率可高達95％，是危害養(yǎng)鴨業(yè)健康發(fā)展的主要疾病之一。

3型鴨甲肝病毒的傳統(tǒng)檢測方法有血清中和試驗、瓊脂擴散試驗和ELISA等。但這些檢測存在耗時長、敏感性較低、不易標準化等缺點，在實際應用中具有一定的局限性。

目前，雖已建立起3型鴨甲肝病毒的PCR檢測方法和熒光定量PCR檢測方法，其檢測敏感性也比較高，但是常規(guī)PCR檢測方法需要使用PCR儀和進行凝膠電泳，熒光定量PCR方法則需要使用更加昂貴的熒光定量儀和試劑等，因而難以適應基層現(xiàn)場檢測需要。

因此，提供一種檢測3型鴨甲肝病毒的引物組、試劑盒與應用，具有特異性好、敏感性高、快速、成本低、操作方法更簡便和適合于基層實驗室檢測是本領域技術人員亟需解決的問題。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種檢測3型鴨甲肝病毒的引物組、試劑盒與應用。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案：

一種檢測3型鴨甲肝病毒的引物組，包括內引物1、2，外引物3、4，引物序列如下：

內引物FIP：5’-CACCACTGAATCTTGCCTTCA-ACACTCGTAAGATAGTTGGAG-3’，SEQ IDNo.1；

內引物BIP：5’-CAAAGGCCCAGAAGCATTCAAA-GTAGTTGTAATATTCAGGACCAT-3’，SEQ IDNo.2；

外引物F3：5’-AACACCTGCATTTCTGCC-3’，SEQ ID No.3；

外引物B3：5’-GAGCTTTCAACTTGGAACAA-3’，SEQ ID No.4。

本發(fā)明還提供了一種基于上述引物組的檢測試劑盒，反應液包括：10×BstBuffer、Bst DNA聚合酶8U/μL、10mM dNTPs、100mM硫酸鎂、20μM內引物1、20μM內引物2、20μM外引物3、20μM外引物4、10M甜菜堿、625μM鈣黃綠素、12.5mM氯化錳和雙蒸水.

優(yōu)選的：反應液每管24μL，其組成為：2.5μL 10×BstBuffer、1μL Bst DNA聚合酶8U/μL、3.5μL 10mM dNTPs、2μL 100mM硫酸鎂、2μL 20μM內引物1、2μL 20μM內引物2、0.25μL20μM外引物3、0.25μL 20μM外引物4、2μL 10M甜菜堿、1μL 625μM鈣黃綠素、1μL 12.5mM氯化錳和6.5μL雙蒸水。

本發(fā)明還提供了上述的引物組在制備檢測3型鴨甲肝病毒的試劑盒中的應用。