[發(fā)明專(zhuān)利]一種用于同時(shí)檢測(cè)多種疾病標(biāo)志物電化學(xué)適配體傳感器

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010537179.X
• 申請(qǐng)日: 2020-06-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111721819B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-10-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邱彬;趙華楠;羅子伊;傅志宏;夏偉耀
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 創(chuàng)蔚來(lái)（平潭）科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N27/327
• 分類(lèi)號(hào): G01N27/327;G01N27/26
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種電化學(xué)適配體傳感器用于同時(shí)檢測(cè)多種疾病標(biāo)志物的方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟1：選取材料和儀器：DNA序列名稱(chēng)包括DNA序列A1為CEA-Apt1，序列為5’-SH-TATCCAGCTTATTCAATT-3’、DNA序列A2為CEA-Apt2，其序列為5’-COOH-AGGGGGTGAAGGGATACCC-3’、DNA序列B1為PDGF-BBApt1，序列為5’-SH-CAGGCTACGGCACGTAGAGCATCACCATGATCCTG-3’、DNA序列B2為PDGF-BB Apt2，序列為5’-COOH-CAGGCTACGGCACGTAGAGCATCACCATGATCCTG-3’；

步驟2：PEI-Au的合成：在10.0mL 1.2mmol/L氯金酸溶液中快速加入1.0mL 4％PEI溶液，磁力攪拌下，升溫至80℃，保持持續(xù)加熱20min，待冷卻至室溫，得到PEI-Au；

步驟3：金屬離子探針的制備：PEI-Au-A2-Cu²⁺的制備：首先，100μL 10μM A2溶液中加入1.0mg EDC和0.25g NHS，混合均勻，37℃反應(yīng)1h；100μL PEI-Au加入以上體系，37℃300rpm振搖反應(yīng)12h，8000rpm離心20min除去沒(méi)有連上的A2，重新分散于200.0μL Cu(NO₃)₂溶液中，37℃反應(yīng)12h，8000rpm離心20min除去上清液，重新分散在1xB2緩沖溶液中，制備完成PEI-Au-A2-Cu²⁺，同樣的方法用于制備PEI-Au-B2-Pb²⁺，不同的是，將其分散在200.0μL Pb(NO₃)₂溶液中，37℃300rpm振搖反應(yīng)12h，8000rpm 20min離心并洗滌數(shù)次后，將獲得的金屬探針?lè)稚⒃?xB2緩沖溶液中，4℃儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?/p>

步驟4：電化學(xué)適配體傳感器的制備：首先，分別用0.3μm和0.05μm的氧化鋁粉對(duì)金電極表面進(jìn)行拋光，并用超純水沖洗，在超純水溶液中超聲15s；在0.5mol/L H₂SO₄溶液中進(jìn)行CV掃描，清潔金電極的表面，氮?dú)獯蹈珊螅⒖淘诮痣姌O表面滴加10μL 1μM Apt1，室溫放置過(guò)夜；超純水沖洗電極，氮?dú)獯蹈桑渭?0.0μL 1mmol/L MCH，37℃避光反應(yīng)40min；超純水沖洗電極，氮?dú)獯蹈桑渭?0.0μL不同濃度的目標(biāo)物CEA或PDGF-BB，超純水沖洗電極，氮?dú)獯蹈桑蛔詈蟮渭?0.0μL金屬離子探針溶液PEI-Au-A2-Cu²⁺或PEI-Au-B2-Pb²⁺，37℃反應(yīng)120min，用0.1mol/L Tris-HCl沖洗電極，傳感器制備完成，置于4℃儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?/p>

步驟5：多個(gè)疾病標(biāo)志物的檢測(cè)：分別使用Cu²⁺和Pb²⁺合成兩種金屬探針PEI-Au-A2-Cu²⁺和PEI-Au-B2-Pb²⁺，按照1：1的比例混合得到用于同時(shí)檢測(cè)的金屬離子探針，同時(shí)檢測(cè)的DPV掃描范圍為-0.6V～0.6V。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種電化學(xué)適配體傳感器用于同時(shí)檢測(cè)多種疾病標(biāo)志物的方法，其特征在于：所述在步驟1中，電解質(zhì)溶液為T(mén)ris-HCl緩沖液，pH＝7.4:0.1mol/L Tris，0.5mol/L NaCl，0.1mol/L KCl，0.1mol/L MgCl₂。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種電化學(xué)適配體傳感器用于同時(shí)檢測(cè)多種疾病標(biāo)志物的方法，其特征在于：所述在步驟1中，DNA緩沖液1X NEBuffer2：50mmol/L NaCl，10mmol/LTris-HCl，10mmol/L MgCl₂，1mmol/LDTT，pH為7.9。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種電化學(xué)適配體傳感器用于同時(shí)檢測(cè)多種疾病標(biāo)志物的方法，其特征在于：所述在步驟4中，滴加的目標(biāo)物是CEA時(shí)，37℃反應(yīng)90min。