[發明專利]一種人誘導性多能干細胞來源的間充質干細胞體外高效制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010536080.8
• 申請日: 2020-06-12
• 公開（公告）號: CN111826348B
• 公開（公告）日: 2023-04-14
• 發明（設計）人: 張磊升;權海宗
• 申請（專利權）人: 云南東森生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K35/28;A61P37/00
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本發明公布了一種人誘導性多能干細胞來源的間充質干細胞體外高效制備方法和應用。制備方法為：1)培養和擴增人誘導性多能干細胞(hiPSCs)；2)通過化學小分子文庫篩選和優化組合的策略，利用兩種化學小分子LLY?507和AZD5153聯合處理上述hiPSCs九天，獲得CD73陽性間充質干細胞比例達到80％以上的人誘導性多能干細胞(hiPSCs)來源間充質前體細胞；3)將上述間充質前體細胞傳代培養兩次，獲得進一步成熟的CD73supgt;+/supgt;CD105supgt;+/supgt;的人誘導性多能干細胞(hiPSCs)來源間充質干細胞(hiPSC?MSCs)；4)基于免疫學手段和細胞生物學分析，鑒定上述制備的CD73supgt;+/supgt;CD105supgt;+/supgt;的人誘導性多能干細胞(hiPSCs)來源細胞為間充質干細胞。實驗表明，通過該化學小分子組合處理的策略，可顯著提高人誘導性多能干細胞(hiPSCs)分化產生間充質干細胞的效率，上述hiPSC?MSCs低表達多能性相關標志分子，且具有典型的成脂、成骨和成軟骨分化以及低免疫原性的功能，可以用于免疫相關性疾病的治療。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，與細胞治療技術和產品有關，具體涉及一種人誘導性多能干細胞來源的間充質干細胞體外高效制備方法和應用。

背景技術

間充質干細胞(mesenchymal?stem/stromal?cells,MSCs)具有造血支持和免疫調節的獨特生物學屬性，并且在體外可定向成脂、成骨和成軟骨分化，廣泛地參與多種組織修復和重建，因此具有優越的再生醫學價值。MSCs最早于1960年代從骨髓中分離而來，隨后從牙髓、臍帶、脂肪等組織中被陸續分離和鑒定而來。已有的臨床前和臨床研究表明，MSCs在多種血液和免疫相關疾病中發揮治療和改善作用。

已有研究提示，間充質干細胞可通過多種途徑發揮疾病治療和組織修復的功能。首先，間充質干細胞作為主要的基質細胞，可為造血發生提供穩定的附著場所和微環境；其次，間充質干細胞可接受不同的細胞因子刺激，定向分化產生特定的終末功能細胞，從而替代損傷或壞死的功能細胞發揮功能；再次，間充質干細胞具有自分泌和旁分泌的功能，可通過分泌多種細胞因子營養受損的組織細胞促進其修復，通過分泌多種抑炎因子抑制過度的炎癥應答反應從而保護機體的組織和細胞免受損傷；最后，間充質干細胞可通過與多種炎癥細胞(巨噬細胞、白細胞等)相互作用，通過歸巢到病變部位并分泌多種趨化因子(CXCL12、SDF-1等)發揮免疫調節作用，促進炎癥部位的功能恢復。盡管MSCs治療特定疾病的具體機理依然十分復雜，但是間充質干細胞可通過上述途徑發揮重要的治療作用和廣闊的再生醫學應用前景。

目前，關于間充質干細胞在臨床前和臨床研究中的應用價值，已經引起國內外學者的廣泛關注。重要的是，目前國際上已經有十余款干細胞新藥上市，目前國內也有5項1類干細胞新藥通過國家藥監局審核注冊。其中，大部分為成體來源(如，骨髓來源間充質干細胞、脂肪來源間充質干細胞)和圍產期來源(如，臍帶來源間充質干細胞、胎盤來源間充質干細胞)。我國學者指出，上述來源的間充質干細胞，往往存在批次差異、供者來源不穩定、長期增殖能力弱、病原微生物以及倫理學風險(Stem?Cells.2016?Feb；34(2):380-91.)。