[發(fā)明專利]一種蝴蝶蘭軟腐病抗性鑒定方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010535538.8
• 申請日: 2020-06-12
• 公開（公告）號: CN111593088A
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發(fā)明（設計）人: 楊祁云;林壁潤;沈會芳;張景欣;孫大元;蒲小明
• 申請（專利權）人: 廣東省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12R1/01
• 代理公司: 深圳市創(chuàng)富知識產(chǎn)權代理有限公司 44367
• 代理人: 吳族平

1.一種蝴蝶蘭軟腐病抗性鑒定方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

S1病原菌分離和準備，獲取蝴蝶蘭軟腐病樣品，按常規(guī)消毒，再用無菌刀將病健交接處的組織切成薄片移到NA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，經(jīng)分離純化，并經(jīng)柯赫氏法則驗證確定；于32℃下在NA平板上培養(yǎng)，獲病原菌純培養(yǎng)；將病原菌株接種于NA培養(yǎng)液，在32℃轉速150r/min培養(yǎng)36h，用無菌水配制成10⁶-10⁷CFU/mL的細菌懸浮液；

S2將滅菌后的濾紙置于培養(yǎng)皿中，噴無菌水至濾紙濕潤后備用；

S3品種準備，選28個蝴蝶蘭品種，每品種準備5片葉子，大小直徑為50mm-70mm，清洗晾干后用質(zhì)量濃度75％的酒精消毒，用高感軟腐病GD1做對照；將消毒后的蝴蝶蘭葉片分別置于保濕好的消毒平板中；

S4接種鑒定，用無菌大頭針在葉片中央密集輕刺5下，在針刺處滴0.2mL步驟S1獲得的細菌懸浮液，每個處理4次重復，每個重復5片葉；

S5調(diào)查評價，放入磁盤中保濕密封，30℃黑暗培養(yǎng)。當葉片出現(xiàn)水漬狀病斑時，每24h觀察并記錄葉片發(fā)病情況；

S6按分級標準進行分級并計算病情指數(shù)，根據(jù)病情指數(shù)進行品種的抗感特性評價。

2.根據(jù)權利要求1所述的蝴蝶蘭軟腐病抗性鑒定方法，其特征在于，蝴蝶蘭品種軟腐病病抗性水平按照以下標準進行確定：

高抗：病情指數(shù)≤20；

抗病：20＜病情指數(shù)≤40；

中抗：40＜病情指數(shù)≤60；

感病：60＜病情指數(shù)≤80；

高感：80＜病情指數(shù)。

3.根據(jù)權利要求1所述的蝴蝶蘭軟腐病抗性鑒定方法，其特征在于，分級標準是：

0級，針刺處無水漬狀病斑；1級，針刺處見水漬狀病斑，病斑不擴散到針刺范圍外0.2cm距離外；

2級病斑擴散到針刺范圍外0.2cm距離外，同時病斑面積≤25％葉片面積；

3級，25％葉片面積＜病斑面積≤50％葉片面積；

4級，50％葉片面積＜病斑面積≤75％葉片面積；

5級，75％葉片面積＜病斑面積。

4.根據(jù)權利要求1所述的蝴蝶蘭軟腐病抗性鑒定方法，其特征在于，病情指數(shù)計算公式為：