[發明專利]一種結直腸癌診斷生物標志物及其應用

有效

• 申請號: 202010535277.X
• 申請日: 2020-06-12
• 公開（公告）號: CN111778330B
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 王傳新
• 申請（專利權）人: 山東大學第二醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113;C12N15/11
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 張貴賓

一種結直腸癌診斷生物標志物,核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本發明首次發現circ?PNN可作為結直腸癌診斷的生物標志物。與正常對照相比，circ?PNN在結直腸癌病人血清外泌體中的表達水平顯著上調。ROC曲線顯示血清外泌體來源的circ?PNN具備良好的診斷結直腸癌的能力。本發明提出的方法對結直腸癌的早期診斷也具有很好的診斷效能。

技術領域

本發明屬于腫瘤分子生物學技術領域，涉及一種結直腸癌診斷生物標志物及其應用。

背景技術

結直腸癌包括結腸癌和直腸癌，是全世界范圍內最常見的消化道惡性腫瘤之一，其病死率在惡性腫瘤中排第二，嚴重危害人類的健康及生命安全。結直腸的癌變是一個多因素共同參與的復雜過程，其發病與飲食、生活方式、遺傳等因素密切相關，男女發病率無明顯差異。因結直腸癌癥狀不明顯，患者就診時多為晚期，且結直腸癌的復發和轉移率較高，因此結直腸癌的生存率仍然不盡人意。目前常用來診斷結直腸癌的幾種診斷方法在臨床應用方便存在著不同程度的局限性：血清腫瘤標志物（CEA、CA19-9）檢測及糞便隱血試驗靈敏度及特異性較低；結直腸鏡檢查價格昂貴、病人依從性差；CT結腸成像檢查對早期診斷有限，對細小腫塊較易出現漏診。因此，尋找一種新型非侵入性、高靈敏度和高特異度的結直腸癌診斷標志物已成為當前醫學界的研究熱點。

環狀RNAs（circular RNAs，circRNAs）是一類新型的內源性非編碼RNA分子，是近年來RNA領域的研究熱點。CircRNAs分子呈閉合環狀，與傳統的線性RNA不同，circRNAs不具有5′帽和3′poly(A)結構，這一特性可以保護它們不易被核糖核酸外切酶（RNase R）降解，與mRNAs相比更穩定。CircRNAs表達豐度較高，在某些情況下，circRNAs的表達豐度是mRNAs的十倍。CircRNAs的閉環結構和對RNase R的不敏感的特性，使其成為腫瘤生物標志物的更好選擇。且大多數circRNAs半衰期長達48 h，半衰期較長的特性為circRNAs作為標志物增加了一份優勢。已有許多研究工作指明，癌癥病人組織細胞中circRNAs表達會出現異常，使用circRNAs作為癌癥診斷和預后的標志物也成為一個新的研究方向。

人體血液標本具有較易獲得和保存等優勢。外泌體可由活體細胞釋放至體液循環中，因此血清中同樣可檢測到外泌體，且豐度較高。由于外泌體的膜結構可以保護外泌體核酸分子不被RNA酶降解，因而血清外泌體中RNA穩定性較高。在腫瘤患者血清外泌體中可檢測到與原發腫瘤一致的RNA分子，提示外泌體RNA以獨特的方式反映腫瘤的生物學特性。以外泌體為載體對腫瘤等疾病進行早期診斷以及治療檢測，可為腫瘤的無創性檢測研究開辟新途徑。

發明內容

本發明針對傳統結直腸癌診斷過程中存在的問題提出一種新型的結直腸癌診斷生物標志物及其應用。

針對上述現有技術的不足，本發明提供了circRNA PNN(circ-PNN)在結直腸癌診斷及治療方面的應用，為臨床結直腸癌的早期診斷和治療提供技術支持。血清外泌體來源的circ-PNN可作為結直腸癌患者的診斷標志物，這一檢查方法容易被受檢者接受，更可成為結直腸癌患者的早診、病情進展的判斷以及預后評估的有效手段。本發明公開了circ-PNN作為一種新的潛在的結直腸癌診斷生物標志物:circ-PNN在結直腸癌病人的血清外泌體樣本中表達顯著上調；受試者工作特征(ROC)曲線顯示circ-PNN具備良好的診斷結直腸癌的潛能。

為了達到上述目的，本發明是采用下述的技術方案實現的：

一種結直腸癌診斷生物標志物,核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

上述結直腸癌診斷生物標志物在制備結直腸癌診斷試劑盒中的應用。

本發明提供結直腸癌診斷生物標志物的引物組合，由以下兩組序列構成，

circ-PNN：上游5’-GCTTGCGCAGCTGCAAGAAG-3’，