[發明專利]一種鼻咽癌類器官專用培養基及無支架培養方法

有效

• 申請號: 202010534159.7
• 申請日: 2020-06-12
• 公開（公告）號: CN111690615B
• 公開（公告）日: 2022-10-25
• 發明（設計）人: 羅國安;王義明;范雪梅;羅喆明
• 申請（專利權）人: 江蘇信安佳醫療科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12N5/071
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 劉洪勛

1.一種培養鼻咽癌無支架3D類器官的方法，其特征在于，是將分離的鼻咽癌腫瘤細胞接種到鼻咽癌類器官專用培養基中，經離心后置于37℃，體積濃度為5％的CO₂培養箱中進行培養，每隔2-3天更換一次無支架培養基；

所述鼻咽癌腫瘤細胞是由鼻咽癌腫瘤組織經預處理獲得，預處理步驟為：

使用4℃預冷的組織洗滌液將鼻咽癌腫瘤組織清洗干凈，在離心管內用滅菌眼科剪將組織剪成小塊；加入10倍體積的組織消化液后，將離心管放置到37℃恒溫箱內搖床，消化30分鐘；用200目尼龍網篩過濾消化液中的細胞，濾液中加入5mL含體積濃度5％FBS的Keratinocyte-SFM培養基終止消化；剩余組織加入組織消化液進行二次消化，30分鐘后過濾收集濾液，加入體積濃度5％FBS的Keratinocyte-SFM培養基終止消化；合并兩次消化獲得濾液，1000rpm，4℃，離心3min，棄上清，所得細胞進行活細胞計數；

所述鼻咽癌類器官專用培養基由以下組分組成，各組分在培養基中的終濃度或體積百分比如下：

EGF 10-30ng/mL、Noggin 100-500ng/mL、Y-27632 10-100μM、A83-01 0.5-1.5μM、SB202190 10-50μM、bFGF 0.5-50ng/mL、氫化可的松20-200ng/mL、Insulin 0.5-1.5μg/mL、青霉素/鏈霉素雙抗1％、FBS 1-5％；Keratinocyte-SFM補充至所需體積；

所述組織洗滌液用PBS配制，其成分含量如下：青霉素/鏈霉素500U/mL，兩性霉素B12.5mg/L；

所述組織消化液用Hank's溶液配制，其成分含量如下：Ⅰ型膠原質量濃度0.1％，Ⅳ型膠原質量濃度0.1％。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，各組分在培養基中的終濃度或體積百分比如下：

EGF 20ng/mL、Noggin 200ng/mL、Y-27632 10μM、A83-01 0.6μM、SB202190 10μM、bFGF5ng/mL、氫化可的松80ng/mL、Insulin 1μg/mL、青霉素/鏈霉素雙抗1％、FBS 2％。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述腫瘤細胞接種的器皿為超低吸附U型細胞培養板。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述離心條件為溫度4℃，轉速1000rpm/min，時間3分鐘。