[發(fā)明專利]西瓜葉片后綠基因連鎖位點及CAPS標記有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010532717.6 | 申請日： | 2020-06-12 |
| 公開（公告）號： | CN111549172B | 公開（公告）日： | 2023-02-28 |
| 發(fā)明（設計）人： | 朱紅菊;劉文革;趙勝杰;何楠;路緒強 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國農(nóng)業(yè)科學院鄭州果樹研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 西安鼎邁知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 61263 | 代理人： | 李振瑞 |
| 地址： | 450000 河*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 西瓜 葉片 基因 連鎖 caps 標記 | ||
1.一種西瓜葉片后綠基因CAPS標記，其特征在于，所述CAPS標記采用引物對dg-F和dg-R進行擴增，且擴增片段經(jīng)BstBI酶切，西瓜葉片后綠純合子得到755bp的條帶，西瓜葉片正常綠純合子酶切成609p和146bp的兩條帶，西瓜葉片正常綠雜合子則顯示出146bp、609bp和755bp的三條帶；
引物dg-F的核苷酸堿基序列為5’-GAAGGATGGCACACTTCGAT-3’；
引物dg-R的核苷酸堿基序列為5’-CAAACTCCACTCCAGGGGTA-3’。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的CAPS標記，其特征在于，用于擴增所述CAPS標記的反應程序為：
階段1：94℃預變性5min；階段2：94℃20s，60℃20s，72℃30s，共循環(huán)34次；階段3：72℃延伸5min；階段4：4℃保持。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的CAPS標記，其特征在于，用于擴增所述CAPS標記的反應體系以20μL計，包括10μL 2×TaqPCRMasterMix，2μL模板DNA，正、反向引物各1μL和6μL ddH2O。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的CAPS標記，其特征在于，所述酶切反應體系以15μL計，包括0.3μL BstBI限制酶、1.5μL buffer、3.2μL ddH2O和10μL PCR產(chǎn)物，37℃酶切過夜。
5.檢測權(quán)利要求1所述西瓜葉片后綠基因CAPS標記的試劑在西瓜葉片后綠性狀分子育種中的應用。
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