[發明專利]一種納米-細菌的雜合體系的制備方法

有效

• 申請號: 202010532428.6
• 申請日: 2020-06-12
• 公開（公告）號: CN111744010B
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發明（設計）人: 何耀;王后禹;湯佳麗
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: A61K41/00
• 分類號: A61K41/00;A61K47/69;A61K49/00;A61P35/00;B82Y5/00;B82Y40/00;A61K35/74;A61K35/742
• 代理公司: 蘇州見山知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32421
• 代理人: 袁麗花

1.一種納米-細菌雜合體系的制備方法，其特征在于包括下述步驟：

(1)將濃度為25mg/mL的帶有氨基基團的熒光納米材料溶液和濃度為10mg/mL的多糖配體溶液按體積比3:2混合，并于70℃振蕩反應4～6小時后，加入2倍混合液體積的濃度為10μg/mL的硼氫化鈉溶液，于室溫下振蕩反應過夜，超濾離心除去多余的未反應上的多糖配體分子，制備得到多糖配體偶聯熒光納米材料復合物溶液；

(2)將步驟(1)制備得到的多糖配體偶聯熒光納米材料復合物溶液和濃度為200μg/mL的光熱劑溶液按體積比2：1混合后，于室溫下振蕩反應12～24小時，通過超濾離心除去未反應上的光熱劑分子，得到熒光納米探針溶液；

(3)將可在特定溫度下表達腫瘤壞死因子TNFα的質粒pBV220-TNFα按質粒轉化方法轉化入細菌中，得到可表達抗腫瘤分子的工程菌，將工程菌活化清洗后溶于生理鹽水中制成濃度為1.0×10⁷-1.0×10⁸CFU/mL的工程菌懸液；

(4)將步驟(2)制備得到的熒光納米探針溶液和步驟(3)得到的工程菌懸液按體積比1:5混合后，置于搖床中培養一段時間后，超濾離心去除未結合的熒光納米探針后，采用0.9wt％的NaCl溶液對細菌離心清洗，得到純化的納米-細菌雜合體系。

2.根據權利要求1所述的一種納米-細菌雜合體系的制備方法，其特征在于：步驟(1)中所述的熒光納米材料包括熒光硅納米顆粒、復合熒光二氧化硅納米顆粒、II-IV族量子點、熒光納米微球和熒光納米碳點中的任一種，所述的多糖配體包括麥芽糖糊精、直鏈淀粉和葡萄糖聚合物中的任一種。

3.根據權利要求1所述的一種納米-細菌雜合體系的制備方法，其特征在于：步驟(2)中所述的光熱劑包括吲哚菁綠(indocyanine green，ICG)、IR780和花菁類染料中的任一種。

4.根據權利要求1所述的一種納米-細菌雜合體系的制備方法，其特征在于：步驟(2)中所述的超濾離心條件為采用3K的超濾管，于7500rpm下離心處理15min。

5.根據權利要求1所述的一種納米-細菌雜合體系的制備方法，其特征在于：步驟(3)中所述的抗腫瘤分子包括細胞毒性分子、細胞因子和腫瘤抗原中的任一種；所述的細菌包括大腸桿菌、沙門氏菌和芽孢桿菌中的任一種。

6.根據權利要求1所述的一種納米-細菌雜合體系的制備方法，其特征在于：步驟(4)中所述的培養時間為1.5-2.5小時，溫度為37℃，搖床轉速為200rpm；所述的超濾離心條件為8000rpm下離心處理10min。