[發明專利]lncRNA AK124826及其相關分子在診斷多發性肌炎/皮肌炎中的應用

在審

• 申請號: 202010532347.6
• 申請日: 2020-06-11
• 公開（公告）號: CN111617096A
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發明（設計）人: 蔣廷旺;薛建中;韓志君;龔燕萍;高明珠
• 申請（專利權）人: 常熟市第二人民醫院
• 主分類號: A61K31/713
• 分類號: A61K31/713;A61P37/02;A61P17/00;A61P21/00;C12Q1/6883
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 胡建華

本發明公開了預防或治療多發性肌炎/皮肌炎藥物或診斷試劑或試劑盒中的應用。本發明還公開了lncRNA AK124826慢病毒過表達載體在制備預防或治療多發性肌炎/皮肌炎藥物或診斷試劑或試劑盒中的應用。本發明還公開了lncRNA AK124826的RNAi干擾載體在制備預防或治療多發性肌炎/皮肌炎藥物或診斷試劑或試劑盒中的應用。

技術領域

本發明屬于生物技術和治療領域，具體涉及lncRNA AK124826及其相關分子在診斷多發性肌炎/皮肌炎中的應用。

背景技術

多發性肌炎/皮肌炎(PM/DM)是較常見的自身免疫性疾病，發病過程中CD4+T細胞發揮重要作用，Th17/Treg細胞數量和功能失衡，但具體發病機制尚不完全清楚。

多發性肌炎和皮肌炎(polymyositis and dermatomyositis，PM/DM)是一種典型的自身免疫性疾病，其主要表現為肌肉組織淋巴細胞浸潤、累及橫紋肌，血清特征性抗Jo-1抗體陽性，近年來PM/DM發病率逐年升高，目前尚無有效根治療法。PM/DM的發病機理復雜，涉及遺傳、感染、免疫功能及microRNA異常表達等眾多因素，近年來，不斷深入研究該病的發病機制，目前認為在+T細胞異常活化，Th17細胞因子反應異常，但具體機理尚未完全闡明。PM/DM患者中存在Th17表達異常。Th17細胞是新發現的CD4+T細胞的亞型。TournadreA等研究發現，PM/DM患者肌肉組織中CD4⁺T細胞陽。Tournadre A等研究發現，PM/DM患者肌肉組織中CD4⁺T細胞陽性，IL-17表達陽性，Th17細胞數量顯著增加。

白細胞介素-27(IL-27)在調控Th17細胞反應中起重要作用。IL-27是一種新的IL-6/IL-12家族細胞因子，主要作用于各種免疫細胞而發揮廣泛調節作用，在自身免疫性疾病中扮演重要角色。IL-27可以通過下調IL-6和TGF-β的表達抑制Th17細胞的分化，同時，IL-27還可以通過抑制STAT1、STAT3的磷酸化，調控Th17細胞反應。研究發現，多發性硬化急性期患者外周血IL-27水平顯著降低，IL-17水平和Th17細胞數量顯著增加，IL-27和IL-17的表達呈顯著負相關，初步提示IL-27可能通過抑制IL-17的分泌，參與多發性硬化的發病。自身免疫性腦脊髓炎小鼠模型研究中發現，IL-27受體EBI3基因敲除，小鼠炎癥反應加重，炎癥組織中Th17細胞數量增多。

發明內容

發明目的：本發明研究發現，PM/DM患者外周血CD4⁺T細胞中Th17細胞百分率顯著增多，初步結果提示PM/DM患者存在Th17細胞表達失調，其機制尚不清楚。本發明研究發現，PM/DM患者外周血IL-27表達水平較健康對照者顯著降低，但PM/DM患者中IL-27的表達如何被調節，及其與Th17/Treg細胞平衡關系，尚不清楚。

本發明研究發現，lncRNA AK124826在PM/DM患者CD4+T細胞中高表達，IL-27在PM/DM患者中低表達，芯片網絡調控圖預測IL-27是lncRNA AK124826的作用靶點。

因此，我們提出lncRNA AK124826通過靶基因IL-27影響Th17/Treg平衡，參與PM/DM的發病。首先觀察lncRNA AK124826在PM/DM患者中的表達特點；其次，采用慢病毒過表達和干擾技術研究lncRNA AK124826對PM/DM患者Th17/Treg細胞分化的作用機制；第三，驗證IL-27是lncRNA AK124826的功能靶點。本發明為診斷和治療PM/DM提供新的思路。

本發明以PM/DM患者為疾病組；運動神經元病，重癥肌無力，進行性肌肉營養不良，風濕性多肌痛等患者為疾病對照組；肝腎功能指標正常的健康體檢者為正常對照組。分離上述研究對象的外周血CD4+T細胞及血清標本。