[發(fā)明專利]一種新型冠狀病毒檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010531632.6
• 申請日: 2020-06-11
• 公開（公告）號: CN111500792A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 湯光輝;薛良;代文俊;李觀得;劉南松;龔姣姣
• 申請（專利權(quán)）人: 亞能生物技術(shù)(深圳)有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 深圳市博銳專利事務(wù)所 44275
• 代理人: 林棟

本發(fā)明涉及基因檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種新型冠狀病毒檢測試劑盒，包括crRNA、Cas12蛋白、RPA上下游引物、緩沖體系和單鏈DNA報告分子；所述crRNA為針對靶標基因設(shè)計特異性的crRNA；所述RPA上下游引物為：針對新型冠狀病毒的保守區(qū)ORF1ab和N基因區(qū)域?qū)ふ?’?TTTN?3’序列，并在其近5’區(qū)域0?200bp內(nèi)設(shè)計正向引物，在其近3’區(qū)域25?200bp內(nèi)設(shè)計反向引物。本發(fā)明有益效果在于：由于RPA等溫擴增對樣本要求較低，所以本發(fā)明可以采用快速簡單的樣本處理方式，并且RPA介導的DNA擴增能夠在30?42℃條件下進行，因此擺脫了對較為精密的PCR儀的依賴。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種新型冠狀病毒檢測試劑盒。

背景技術(shù)

冠狀病毒感染后常見的體征為呼吸道癥狀、發(fā)熱、咳嗽、氣促和呼吸困難 等。在較嚴重病例中，感染可導致肺炎、嚴重急性呼吸綜合征、腎衰竭，甚至 死亡。但由于新型冠狀病毒存在初始癥狀不明顯，潛伏期長達14天等相對隱蔽 的因素，患者和攜帶者往往不能及時發(fā)現(xiàn)，從而加劇了傳播。

采用快速有效的手段對感染者進行早期特異的診斷是及時發(fā)現(xiàn)和隔離傳染 源，有效救治患者，保障社會秩序的重要手段。這就對病原體的快速診斷技術(shù) 提出了新的要求，但在烈性傳染病大規(guī)模爆發(fā)時，對病原體的快速診斷非常困 難，尤其在某些缺乏實驗室檢測條件的地區(qū)這種挑戰(zhàn)顯得尤為突出。

核酸診斷技術(shù)具有快速、靈敏的優(yōu)勢，能夠檢測處于潛伏期的病原體。目 前大多數(shù)實驗室采用PCR方法對新型冠狀病毒進行檢測，其靈敏度特異性均較 好，但是耗時較長，并且儀器設(shè)備價格昂貴，難以在基層檢驗機構(gòu)普及。近年 來出現(xiàn)了如RPA(RecombinasePolymerase Amplification，重組酶聚合酶等溫擴 增),LAMP等多種恒等溫擴增技術(shù)，可用于現(xiàn)場檢測，但如何快速準確地檢測擴 增產(chǎn)物一直是其發(fā)展制約因素。目前RPA擴增可結(jié)合探針檢測擴增產(chǎn)物，探針 的引入可阻礙擴增反應(yīng)的進行，因此該方法對引物探針組合篩選要求極高，難 以達到快速應(yīng)對突發(fā)疫情的目的。并且探針法本身并未改變其單級擴增反應(yīng)的 本質(zhì)，相較于目前市場上的實時定量PCR(Q-PCR)方法，并未實質(zhì)性地提升檢 測靈敏度。因此亟需建立一種可應(yīng)用于現(xiàn)場、簡易、快速、且高靈敏度的檢測 技術(shù)，近年來發(fā)展起來的CRISPR/Cas檢測技術(shù)成為理想的候選方案。

CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats)是大多數(shù)細 菌及古細菌中抵御病毒入侵的一種獲得性免疫方式。當病毒入侵時，細菌生成 對應(yīng)的能識別病毒基因組的crRNA，該crRNA引導具有核酸內(nèi)切酶活性的Cas 蛋白(CRISPR-associated proteins)對病毒靶標序列進行識別和切割。