[發明專利]一種索瑪魯肽衍生物及其應用

在審

• 申請號: 202010531568.1
• 申請日: 2020-06-11
• 公開（公告）號: CN113801234A
• 公開（公告）日: 2021-12-17
• 發明（設計）人: 于歌;劉慧玲;陳衛
• 申請（專利權）人: 寧波鯤鵬生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K1/20;C07K1/06;C12P21/06;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/26;A61P3/10;C12R1/19
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 肖艷;徐迅

本發明提供了一種索瑪魯肽衍生物及其制備方法。具體地，本發明提供了包含綠色熒光蛋白折疊單元和索瑪魯肽或其活性片段的融合蛋白。本發明的融合蛋白表達量顯著提高，融合蛋白中的索瑪魯肽蛋白折疊正確，具有生物活性。并且，本發明融合蛋白中的綠色熒光蛋白折疊單元可以被蛋白酶消化成小片段，和目的蛋白相比分子量差別大，容易分離。本發明還提供了利用該融合蛋白制備索瑪魯肽的方法及制備中間體。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，更具體地涉及一種索瑪魯肽衍生物及其應用。

背景技術

糖尿病是全球范圍內威脅人類健康的一大疾病。在中國，隨著人民生活方式的改變和老齡化進程的加快，糖尿病的患病率呈快速上升趨勢。糖尿病的急慢性并發癥，尤其是慢性并發癥累計多個器官，致殘、致死率高，嚴重影響患者的身心健康，并給個人、家庭和社會帶來沉重的負擔。

索瑪魯肽是由Novo Nordisk開發的一種降糖藥物，該產品能顯著降低2型糖尿病患者的糖化血紅蛋白(HbA1c)水平及減輕體重，同時大大降低低血糖的風險。Semeglutide是通過對GLP-1(7-37)進行修飾和改造獲得。與Liraglutide相比，Semeglutide的脂肪鏈更長，疏水性增加，但是Semeglutide經過短鏈的PEG修飾，親水性大大增強。PEG修飾后不但可以與白蛋白緊密結合，掩蓋DPP-4酶水解位點，還能降低腎排泄，可延長生物半衰期，達到長循環的效果。

索瑪魯肽的CAS號：910463-68-2，英文名Semaglutide，其序列如下：H-His1-Aib2-Glu3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Val10-Ser11-Ser12-Tyr13-Leu14-Glu15-Gly16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys20(PEG2-PEG2-γ-Glu-Octadecanedioicacid)-Glu21-Phe22-Ile23-Ala24-Trp25-Leu26-Val27-Arg28-Gly29-Arg30-Gly31-OH。

專利申請號為CN201611095162，其采用片段縮合的方法合成得到全保護索瑪魯肽，裂解后獲得索瑪魯肽粗肽。由于該方法采用片段進行縮合，其原料不易獲得，且成本高昂。另外，先縮合主鏈至第5位的Thr，再脫除20位Lys的側鏈保護基團Alloc，進行側鏈的縮合。此方法在合成過程中易造成片段2樹脂的縮聚，大大降低20位Lys后的氨基酸及片段1的偶聯效率，且易產生消旋雜質，不利于工業化生產。

專利申請號為CN201511027176，采用固相合成方法獲得全保護索瑪魯肽樹脂，經裂解后獲得索瑪魯肽粗肽，經純化獲得索瑪魯肽精品。此方法采用先縮合主鏈，再脫除Lys側鏈保護基團Alloc，進行側鏈的縮合。此方法在合成過程中易造成樹脂的縮聚，大大降低偶聯效率，且易產生消旋雜質，特別是造成最后一個氨基酸His的消旋，大大降低了產品的收率，增加了生產成本。

因此，本領域技術人員致力于新的方法生產索瑪魯肽。

發明內容

本發明的目的在于提供一種索瑪魯肽衍生物及其應用。

在本發明的第一方面，提供了一種索瑪魯肽前體融合蛋白，所述的索瑪魯肽融合蛋白從N端到C端具有式I所示的結構：

A-FP-TEV-EK-G (I)

式中，

“-”代表肽鍵；

A為無或前導肽序列，

FP為綠色熒光蛋白折疊單元；

TEV為第一酶切位點，較佳地為TEV酶酶切位點(如序列ENLYFQG所示，SEQ ID NO:8)；

EK為第二酶切位點，較佳地為腸激酶酶切位點(如序列DDDDK所示，SEQ ID NO:9)；