[發明專利]一種二價抗海蛇毒血清的制備方法

有效

• 申請號: 202010529996.0
• 申請日: 2020-06-11
• 公開（公告）號: CN111620947B
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 杜宇;林熾賢;高建芳;李佳頎;呂金更;梁丁文;趙祖越;陳忠蔭;劉其則;計翔
• 申請（專利權）人: 海南熱帶海洋學院
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/06;A61K39/395;A61P17/02;A61P39/02
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本發明涉及抗蛇毒血清的制備技術領域，尤其涉及一種二價抗海蛇毒血清的制備方法。本發明提供的二價抗海蛇毒血清的制備方法，以青環海蛇和平頦海蛇的蛇毒為抗原,以羊為免疫對象，通過改進免疫方案與劑量，獲得了二價抗海蛇毒血清。該血清能夠對海蛇蛇毒起到良好的中和效果。該血清針對我國優勢種海蛇蛇毒，有助于提高蛇傷治療的成功率，降低致殘率，減少血清過敏等并發癥。該制備方法穩定有效在不同個體之間重現度良好，為完善海蛇咬傷的臨床治療及藥物制備提供重要參考。

技術領域

本發明涉及抗蛇毒血清的制備技術領域，尤其涉及一種二價抗海蛇毒血清的制備方法。

背景技術

我國境內毒蛇資源分布廣泛，種類繁多，蛇傷危害較為嚴重，海蛇也不例外。隨著人類海洋活動頻率的增加，海蛇(特別是青環海蛇和平頦海蛇)咬傷的數量隨之增加。在中國，醫院治療海蛇咬傷主要通過一些方法，如注射同科的抗銀環蛇蛇毒血清或抗眼鏡蛇蛇毒血清，但這兩種抗蛇毒血清對海蛇毒液的中和能力較弱，通常需要增加注射劑量。還有的醫院會采用中藥與激素類藥物結合或直接切開氣管的方式來治療海蛇咬傷。而抗蛇毒血清被認為是治療蛇咬傷最有效的藥物，因此有針對性的抗海蛇毒血清的生產是必要的。

我國廣西醫科大學李其斌教授2011年與日本蛇類學會合作開發了一種兔源性雙價抗青環海蛇和平頦海蛇毒血清，曾在廣西北海市等地用于臨床急救海蛇咬傷，治療效果明顯，但是未在國內市場大規模推廣上市。目前軍隊有關單位研制出了抗青環海蛇毒血清，但是其應用及治療效果尚無消息報道。第二軍醫大學也正在進行抗海蛇毒血清制備的研究。盡管有些國家像澳大利亞已經開發出針對當地海蛇毒的單價抗裂頦海蛇毒血清，但其成本高并且對我國海蛇咬傷的治療效果尚不清楚。因此，研制針對我國優勢種海蛇的抗海蛇毒血清具有較高的應用價值。目前已經面市的抗蛇毒血清通常以馬作為免疫動物生產的，但是馬的養殖成本較高，且采血較為困難。

一般來說，蛇毒可以用同種或異種的抗蛇毒血清來中和，但是異種抗蛇毒血清的中和效果通常會下降。當無法識別哪種蛇咬傷時，往往很難決定使用哪種抗蛇毒血清，針對某一地區相關蛇類，特別是海蛇，可以直接使用針對該地區蛇類的多價抗蛇毒血清，而無需識別蛇種類。因此研制多價抗海蛇毒血清具有更高的應用價值。

發明內容

有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供一種二價抗海蛇毒血清的制備方法，以羊為免疫動物，不僅降低成本，且能夠快速達到效價要求。

本發明提供的二價抗海蛇毒血清的制備方法，包括：

步驟1：分別將青環海蛇和平頦海蛇的蛇毒凍干粉溶解于生理鹽水，然后將二者混合制得蛇毒溶液，除菌后80～100℃滅活，再與佐劑混合，制得乳化抗原；

步驟2：采用上述乳化抗原對羊進行免疫，第一次免疫的劑量為0.02μg/g，此后分別于第2周、第3周、第5周、第7周、第9周、第14周和第17周加強免疫，免疫劑量依次為0.05μg/g、0.1μg/g、0.2μg/g、0.5μg/g、1μg/g、0.5μg/g、0.5μg/g；收集羊的血清獲得為二價抗海蛇毒血清；所述劑量以青環海蛇和平頦海蛇的蛇毒凍干粉的質量之和計算。

在本發明中，所述蛇毒溶液中，青環海蛇毒的濃度為20μg/μL～30μg/μL；平頦海蛇毒的濃度為20μg/μL～30μg/μL。一些實施例中，所述蛇毒溶液中，青環海蛇毒的濃度為25μg/μL；平頦海蛇毒的濃度為25μg/μL。

本發明的方案中，采用高溫水浴的方法對蛇毒進行滅活，避免了傳統方法中甲醛的使用。一些實施例中，所述滅活的條件為90℃，30min。

在本發明中，所述乳化抗原中，佐劑為弗氏完全佐劑或弗氏不完全佐劑；

所述第一次免疫的乳化抗原中佐劑為弗氏完全佐劑；

所述第2～8次免疫的乳化抗原中佐劑為弗氏不完全佐劑；

所述佐劑為弗氏完全佐劑，所述佐劑與蛇毒溶液的體積比為1:1；