[發明專利]一種微生物低溫破膠酶的制備及其應用方法

在審

• 申請號: 202010529673.1
• 申請日: 2020-06-11
• 公開（公告）號: CN111621487A
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發明（設計）人: 雷光倫;褚程程;姚傳進;達祺安;李蕾;曲曉歡;孟凡怡
• 申請（專利權）人: 中國石油大學（華東）
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C09K8/66;C12R1/07
• 代理公司: 武漢聚信匯智知識產權代理有限公司 42258
• 代理人: 沙莎

1.一種微生物低溫破膠酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1，配制種子培養基，制備牛肉膏蛋白胨液體培養基，在0.1MPa下蒸汽滅菌30min，冷卻至室溫備用；

S2，制備種子液，將所使用的解淀粉芽胞桿菌接種到種子培養基中，溫度32℃，轉速100rpm的搖床中水浴培養12h，得到解淀粉芽胞桿菌的種子液；

S3，配制發酵培養基，配制發酵培養基，0.1MPa下蒸汽滅菌30min，冷卻至室溫備用；

S4，制備粗酶液，將種子液加至發酵培養基中，接種量0.4％(V/V)，溫度32℃，轉速100rpm的搖床中培養24h得到粗酶液；

S5，離心抽濾粗提純，將粗酶液在轉速4000rpm下離心20min，再用砂芯過濾器，依次使用過濾精度為0.8μm、0.65μm、0.45μm、0.22μm的微孔濾膜進行抽濾，最終得到解淀粉芽胞桿菌的酶液。

2.根據權利要求1所述的一種微生物低溫破膠酶的制備及其應用，其特征在于：所述步驟S1中牛肉膏蛋白胨液體培養基的配方包括牛肉膏：0.3g、蛋白胨：1g、氯化鈉：0.5g、水：100ml。

3.根據權利要求1所述的一種微生物低溫破膠酶的制備及其應用，其特征在于：所述步驟S3中發酵培養基的配方包括牛肉膏：0.3g、胍膠：0.8g、硝酸鉀：0.4g、硫酸銨：0.4g、磷酸氫二鉀：0.4g、氯化鎂：0.03g、氯化鈣：0.03g、水200ml。

4.一種微生物低溫破膠酶的應用方法，其特征在于，包括以下步驟：

Sa,配制模擬地層水,將5.5g氯化鈉、2g氯化鉀、0.45g六水合氯化鎂、0.55g氯化鈣依次溶解于蒸餾水中，再于容量瓶中定容至250mL，此溶液中總礦化度值為33044.85mg/L；

Sb,配制緩沖液,利用檸檬酸、碳酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉等按照不同比例配制pH值3～10.8的緩沖液；

Sc,配制水基胍膠壓裂液基液,用緩沖液和模擬地層水配制成濃度為0.4％的水基胍膠壓裂液基液備用；

Sd，交聯，在水基胍膠壓裂液基液加入0.5％(V/V)的飽和硼砂水溶液用玻璃棒充分攪拌，靜置4h以上使其交聯成實驗用壓裂液；

Se，進行對比實驗，將2～10％(V/V)的酶液加入壓裂液基液中，不同濃度的酶液設置三個平行實驗組，并設置等量的水作為對照組，再分別加入0～0.2％(V/V)的油田壓裂液用殺菌劑來模擬油田所用壓裂液，在溫度為22～47℃下反應，每隔一定時間段并在室溫條件下測定壓裂液粘度隨時間的變化，觀察規定時間內壓裂液粘度是否達到破膠標準，即3h內粘度小于5mPa·s。