[發(fā)明專利]一種檢測人體干尿濾紙片中多種有機(jī)酸的定量檢測方法

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• 申請日: 2020-06-11
• 公開（公告）號: CN111638287A
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄔智剛;朱文漓;葉尚宇
• 申請（專利權(quán)）人: 成都益康譜科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測人體干尿濾紙片中多種有機(jī)酸的定量檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括如下步驟是：①采用濾紙片收集尿液樣本；②對干尿濾紙片進(jìn)行洗脫處理，測定肌酐含量；③洗脫尿液與內(nèi)標(biāo)液混合后通過有機(jī)溶劑將目標(biāo)有機(jī)酸萃取純化，氮?dú)獯蹈珊笕苡谒校缓笥脧?qiáng)陰離子交換柱純化，有機(jī)溶劑洗脫后氮?dú)獯蹈桑苡谒械玫酱郎y樣本；④將上述待測樣本通過液相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用檢測，同步對多種有機(jī)酸進(jìn)行定性和定量的批量檢測。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述，其特征在于：采集尿液所用濾紙片為裁剪為特定尺寸的濾紙，包括但不限于新華1號，新華3號和Whatman公司903號濾紙。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述，其特征在于：采集樣本為人體晨尿。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述，其特征在于：干尿片制備方式為將一定量人體新鮮晨尿滴到定量濾紙片上，使尿液分布均勻，濾紙片晾干后密封保存?zhèn)溆谩?/p>

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述，其特征在于：干尿片洗脫處理所用溶劑包括但不限于水、PBS、生理鹽水，優(yōu)選洗脫溶劑為生理鹽水。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟④中液質(zhì)聯(lián)用檢測的液相色譜條件為：色譜柱為鍵合相色譜柱，進(jìn)樣量為5-50μL，流動相A為含1-10mmol/L的乙酸銨水溶液+0.1％-1％甲酸的純水，流動相B為乙腈甲醇的混合溶液，乙腈與甲醇的質(zhì)量比為9-1:1-9；流動相的流速為0.1-2.0mL/min；流動相的梯度(以體積百分比計)：

0-1min,A:30-100％,B:70-0％；

1.1-5min,A:10-60％,B:90-60％；

5.1-9min,A:0-50％,B:100-50％；

9.1-11min,A:50-100％,B:50-0％；

11.1min,A:30-100％,B:70-0％。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述鍵合相色譜柱為C18或C8等鍵合相色譜柱，規(guī)格為50-150mm×2.1-4.6mm,1.8-5μm。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟3)中液質(zhì)聯(lián)用檢測的質(zhì)譜條件為：采用電噴霧(ESI)離子源，負(fù)離子MRM掃描方式，霧化氣流速為5-10L/min，氣簾氣流速為5-20L/min，離子源電壓為-2000-4500V，離子源溫度為200-400℃。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述有機(jī)酸化合物包括人體尿液中代謝產(chǎn)生的主要有機(jī)酸產(chǎn)物；采用多反應(yīng)監(jiān)測的質(zhì)譜掃描模式，目標(biāo)物的離子對監(jiān)測如下：乙二酸(m/z 145.2—83.1)、辛二酸(m/z 173.2—111.2)、乙基丙二酸(m/z131.1—87.1)、乳酸(m/z 89.1—43.1)、丙酮酸(m/z 87.1—43.1)、β-羥基丁酸(m/z103.1—59.1)、檸檬酸(m/z 191.1—87.1)、順式烏頭酸(m/z 173.1—85.1)、異檸檬酸(m/z191.1—73.1)、α-酮戊二酸(m/z 145.1—101.1)、α-酮異戊酸(m/z 115.1—115.1)、α-酮異己酸(m/z 129.2—129.2)、α-酮-β-甲基戊酸(m/z 129.2—129.2)、琥珀酸(m/z 117.1—73.0)、富馬酸(m/z 115.1—71.0)、蘋果酸(m/z 133.1—115.0)、羥甲基戊二酸(m/z117.1—59.0)、黃尿酸(m/z 204.2—160.1)、β-羥基異戊酸(m/z 117.1—73.1)和甲基丙二酸(m/z 117.1—73.1)；內(nèi)標(biāo)：D3-甲基丙二酸(m/z 120.1—73.1)、D3-乙基丙二酸(m/z134.1—87.1)、D4-檸檬酸(m/z 195.1—87.1)。