[發明專利]一種水環境DNA樣品的采集及常溫干燥儲存方法

在審

• 申請號: 202010528875.4
• 申請日: 2020-06-11
• 公開（公告）號: CN111635928A
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發明（設計）人: 楊江華;張效偉
• 申請（專利權）人: 南京易基諾環保科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/24
• 分類號: C12Q1/24
• 代理公司: 江蘇瑞途律師事務所 32346
• 代理人: 王琳琳;陳彬

本發明公開了一種水環境DNA樣品的采集及常溫干燥儲存方法，屬于環境檢測技術領域。所述的水環境DNA樣品的常溫干燥儲存方法為利用濾膜進行對水體中樣品進行采集，采集完成后，在負壓吸附的條件下依次利用異丙醇、乙醇對濾膜進行處理，最后將濾膜進一步風干后密封儲存，其中，乙醇的用量為異丙醇用量的1.2?1.5倍。該方法能有效的延長環境樣本的儲存時間，降低環境水樣的儲存條件，實現濾膜中環境DNA樣品的常溫條件下的長期存儲，顯著降低成本，提高時效，而且不會對后續的DNA監測造成干擾。

技術領域

本發明屬于環境檢測技術領域，更具體地說，涉及一種水環境DNA樣品的采集及儲存方法。

背景技術

眾所周知，物種豐富度的考察基于環境DNA濃度，環境DNA濃度受DNA的釋放和降解過程的影響，同時環境DNA提取方法和水樣本體積也會影響環境DNA濃度。eDNA宏條形碼技術主要是通過獲取受納水體中的浮游生物(包括植物體、動物體、微生物體以及不同尺寸的生物體)、水樣中的懸浮顆粒物等為基礎來檢測環境DNA，因此，若想最真實的反應相應水體環境中的DNA，必須要保證所采集樣品的真實有效性。為使上述變化降低到最低程度，一般會對樣品采取一定的保護措施，比如采取冷藏、冷凍的措施或者添加穩定劑等；然后，盡可能地縮短運輸時間、盡快分析測定。

經檢索發現，現有技術中一般環境DNA樣品的存儲多是以水樣存儲、低溫冷凍存儲的方式為主，對環境樣品的干燥主要采用的“凍干法”，該方法的核心是在低溫環境下利用真空下水的凝華作用逐漸除去水分，優點是環境樣本在脫水的過程中始終保持低溫，有效抑制樣本中微生物的繁殖，能很好的延緩環境樣品中環境DNA的降解；缺點是該操作需要借助凍干機來完成，只能在實驗室中完成，無法在野外操作，另外樣品的凍干過程需要預冷，樣品凍干慢，時效性差。

經檢索，現有技術已經公開了相關的申請案，如授權公告日為2018年07月17日，授權公告號CN105636937 B的申請案公開了一種用于保存生物樣品的穩定劑，使用時將穩定劑與生物樣品按一定配比混合，利用該穩定劑可以在非冷凍條件下長時間保持生物樣品的完整性和穩定性；但是加入的穩定劑存在干擾監測項目的風險。

因此，開發一種新型有效的水環境DNA樣品采集及儲存方法，對于提高水體環境物種豐富度的分析監測質量具有及其重要的作用。

發明內容

1.要解決的問題

針對現有技術中對于采集得到的環境DNA樣品采用“凍干法”保存存在的操作繁瑣、成本高以及時效性差的缺陷，以及采用添加穩定劑造成監測干擾的缺陷，本發明提供一種水環境DNA樣品的采集及常溫干燥儲存方法，使用濾膜過濾采樣，使環境DNA富集到濾膜上，再依次利用異丙醇、乙醇對濾膜進行干燥處理，最后將濾膜進行干燥存儲，該方法能有效的延長環境樣本的儲存時間，降低環境水樣的儲存條件，實現濾膜中環境DNA樣品的常溫條件下的長期存儲，顯著降低成本，提高時效，而且不會對后續的DNA監測造成干擾。

2.技術方案

為了解決上述問題，本發明所采用的技術方案如下：

本發明提供了一種水環境DNA樣品的采集及常溫干燥儲存方法，包括以下步驟：

1)利用濾膜進行對水環境DNA樣品進行過濾采集，所述的DNA樣品被采集至濾膜；

2)在負壓吸附的條件下依次利用異丙醇和乙醇對濾膜進行過濾處理；所述乙醇的用量為異丙醇用量的1.2～1.5倍；

3)將步驟2)處理后的濾膜風干后密封儲存。

優選的，所述步驟2)中，異丙醇全部過濾完成后至乙醇過濾前仍保持負壓吸附條件，持續0.5～1分鐘。

優選的，所述步驟2)中，保持異丙醇的持續過濾時間至少為30秒，過濾完成后保持負壓吸附條件0.5～1分鐘，再保持乙醇的持續過濾時間至少為1分鐘。