[發(fā)明專利]一種基于膠乳免疫比濁法的測(cè)定試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010528691.8
• 申請(qǐng)日: 2020-06-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111766381B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 伍衛(wèi)姣;趙暢;鄭慧鈴;黃愛(ài);陳婷;舒芹;張雪嬌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢生之源生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N33/531
• 代理公司: 武漢智嘉聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42231
• 代理人: 易賢衛(wèi)

本發(fā)明公開(kāi)了一種基于膠乳免疫比濁法的測(cè)定試劑盒及其應(yīng)用，屬于免疫分析醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，所述試劑盒由R1試劑和R2試劑組成，所述R2試劑中含有偶聯(lián)有抗體的膠乳試劑，所述膠乳試劑由小粒徑膠乳試劑和大粒徑膠乳試劑組成，其中所述小粒徑膠乳試劑中，小粒徑膠乳微球、活化劑和抗體的質(zhì)量比為1：0.08?0.12：0.04?0.06；所述大粒徑膠乳試劑的制備過(guò)程中，大粒徑膠乳微球、活化劑和抗體的質(zhì)量比為1：0.02?0.04：0.005?0.01。本發(fā)明針對(duì)不同粒徑的膠乳微球，分別選取了最適宜的活化劑和抗體用量，以最大限度發(fā)揮不同粒徑膠乳微球的作用，使最終制備得到的試劑盒的功能靈敏度和線性均顯著提高，以充分滿足臨床上的不同需求，同時(shí)試劑盒的其他性能不會(huì)受到影響。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫分析醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于膠乳免疫比濁法的測(cè)定試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

免疫比濁法是抗原抗體結(jié)合動(dòng)態(tài)測(cè)定方法，其基本原理是：當(dāng)抗原與抗體在特殊稀釋系統(tǒng)中反應(yīng)且比例合適時(shí)，形成的可溶性免疫復(fù)合物在促聚劑的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。當(dāng)抗體濃度固定時(shí)，形成的免疫復(fù)合物的量隨著檢樣中抗原量的增加而增加，反應(yīng)液的濁度也隨之增加。通過(guò)測(cè)定反應(yīng)液的濁度與一系列標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，即可計(jì)算出檢樣中抗原的含量。而膠乳免疫比濁法是將待測(cè)抗原相對(duì)應(yīng)的抗體包被在膠乳顆粒上，使抗原抗體結(jié)合物的體積增大，光通過(guò)之后，透射光和散射光的強(qiáng)度變化更為顯著，從而提高試驗(yàn)的靈敏度。

在臨床檢驗(yàn)應(yīng)用上，通常對(duì)檢測(cè)試劑的靈敏度和線性范圍均有較高的要求，如β2-微球蛋白(β2-MG)項(xiàng)目，臨床上發(fā)現(xiàn)在急性腎小管損傷或壞死、慢性間質(zhì)性腎炎、慢性腎衰等情況下，血液中的β2-MG含量顯著升高，濃度可高達(dá)40-80mg/L，而目前市場(chǎng)上的β2-MG測(cè)定試劑盒(膠乳免疫比濁法)的線性只能達(dá)到20mg/L左右，遇到臨床高值會(huì)出現(xiàn)hook效應(yīng)，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此不能滿足臨床需要；同時(shí)在臨床上，尿液中β2-MG含量可以綜合反應(yīng)腎小球或腎小管功能異常，但尿液中β2-MG的含量很低，一般為0.1-0.3mg/L，因此，高靈敏度和高線性的β2-MG測(cè)定試劑才能更好的滿足臨床需要。再比如C反應(yīng)蛋白(CRP)項(xiàng)目，其中超敏CRP檢測(cè)可對(duì)患心血管疾病的危險(xiǎn)性進(jìn)行評(píng)估，當(dāng)含量1.0mg/L為低危險(xiǎn)性，1.0-3.0mg/L為中度危險(xiǎn)性，3.0mg/L為高度危險(xiǎn)性；而常規(guī)CRP檢測(cè)作為感染性指標(biāo)，其含量為50-100mg/L時(shí)常為細(xì)菌感染，病毒感染不常見(jiàn)，100mg/L，提示細(xì)菌感染，可排除病毒感染。因此市面上用于檢測(cè)CRP的試劑一般分兩種，常規(guī)CRP測(cè)量范圍是5-160mg/L，超敏CRP測(cè)量范圍為0.5-5.0mg/L，因此，高靈敏度和高線性的CRP測(cè)定試劑才能更好的滿足臨床需要。諸如此類的項(xiàng)目還有很多，因此臨床上對(duì)于膠乳檢測(cè)試劑的高靈敏度和寬線性范圍的需求比較強(qiáng)烈。

基于上述需求，目前市場(chǎng)上采用大粒徑膠乳微球和小粒徑膠乳微球混合，并優(yōu)化大、小微粒的平均直徑和濃度，以同時(shí)達(dá)到提高試劑靈敏度和線性的目的，如中國(guó)專利CN110133247A公開(kāi)了一種用于檢測(cè)目的抗原的免疫膠乳比濁法測(cè)定試劑盒，通過(guò)將兩種平均粒徑相差50nm以上的微球按照一定比例混合制備試劑以提高試劑盒的靈敏度和線性寬度，然而該專利中大納米微球和小納米微球的制備工藝相同，即大小納米微球中添加的活化劑和抗體含量相同，然而不同粒徑的微球其所需的活化劑含量和所能結(jié)合的抗體含量不同，且體系中活化劑和抗體含量不足或過(guò)量均會(huì)對(duì)試劑的靈敏度和線性寬度產(chǎn)生負(fù)面影響。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供了一種提高膠乳免疫比濁法靈敏度和線性的方法，即根據(jù)不同粒徑大小的微球，選取最適宜的活化劑和抗體用量，以最大限度發(fā)揮不同粒徑微球的作用，使靈敏度和線性寬度均顯著提高。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：